• Santé - Produits, Protéine, Levure

[Biologie Cellulaire] Pharmacologie moléculaire

C'est pour la production de protéines recombinantes. Un système d'expression correspond à l'organisme que tu utilises pour exprimer ta protéine (bactéries, levures, cellules d'insectes...). Lorsque tu produits une protéine dans l'organisme où elle est présente naturellement (par exemple si tu produits une protéine humaine dans des cellules humaines ou une protéine de coli dans E.  [...] coli ), on parle d'expression homologue. Mais si tu produits une protéine humaine dans une levure, ou une protéine de levure dans une bactérie par exemple, tu utilises alors un système d'expression hétérologue.  [...]

[Biochimie] Immunoblotting, anticorps

la protéine existe bien chez la levure sauvage si oui, pour vérifier que la construction de la protéine mutée ou sauvage s'exprime bien, il faut pouvoir la différencier de celle que la levure produit naturellement.  [...] ben oui, l'anticorps spécifique reconnaitrait les deux, alors que l'anti tag ne reconnait que la recombinante. Comme ca tu es sur que ta construction s'exprime, et tu peux en plus purifier ta protéine en utilisant ce tag (d'ailleurs c'est peut être ce qui a été fait non ).  [...]

pour les levuristes

est ce que qq'un pourrait me donner le poids moléculaire du tag 3xHA De plus je voudrais savoir si l'un d'entre vous a déja réaliser des transformations de levure avec des produits de PCR qui permettent d'intégrer des tags au génome de la levure car pour moi, soit aucune levure ne pousse soit les protéines taggées ne sont pas exprimées.  [...] Sinon le niveau d'expression change bcp d'un gene a l'autre donc certains tags peuvent etre indetectables.   [...]

[Biologie Moléculaire] Définition "protéine hétérologue"

Je pense que protéine hétérologue fait référence à des protéines non synthétisées naturellement dans l'organisme la produisant (protéine humaine chez la levure par exemple).  [...] selon de brêves recherches (vive google), il semblerait bien que protéine hétérologues = protéines recombinantes. Donc, tes définitions semblent justes.  [...]

[Biotechnologie] Bloquer l'expression d'un gène chez la levure

Pour l'IPTG je ne suis pas certain qu'il fonctionne chez la levure... je rappelle a toute fin utile que c'est un promoteur bacterien. y'a peu de chance qu'il fonctionne dans la levure, surtout qu'il necessite la presence de la protéine LacI pour etre réprime.  [...] j'ai pas une explication et meme pas une idée pour induire l'expression de ma proteine et la produie vers l'exterieu de la levure.  [...]

Purification protéine taggée avec HIS6

Je dirai que le problème majeur est bien avant la purif et se trouve dans la production et la solubilité de ta protéine dans ton tampon d'extraction. Es-tu contraints de faire ca dans la levure Quel niveau de pureté dois-tu obtenir.  [...] Oui je sui sobligé d'utilisé la levure car il y a un evenement non conventionel de traduction qui se produit sur cet ARNm, or ce que je cherche a faire apres la purif est de passer la proteine en spectro de masse afin de determiner la séquence en aa d'une certaine région de la protéine.  [...]

[Biotechnologie] Ogm absorption

Comme vous le savez surement l'environnement cellulaire est indispensable à la production d'une protéine intègre. Prenez l'exemple du protocole de purification d'une protéine. La première étape est de cloner ce gène dans une souche type bactérie, levure ou cellule d'insecte.  [...] Les modifications post traditionnelles sont différentes d'une espèce à l'autre. C'est la raison pour la quelle dans le cas de la production de médicament il est strictement interdit de produire la protéine dans certaines espèces. Et afin de trouver les bonnes condition on doit effectuer un crible sur des centaines de conditions.  [...]

Aide article : Système d'expression protéique hautement régulé, modulé et à haut niveau (PBAD)

Vectors Containing the Arabinose PBAD Promoter. Cette article démontre l'avantage d'utiliser un système arC -PBAD (d'un point de vue cinétique, efficacité et peu d'effet secondaire), cependant il date de 1995, j'aimerai savoir si actuellement il existe un système de régulation de l'expression protéique qui le surpasse.  [...] Je ne connais pas les taux d'expression que l'ont peut atteindre avec ce système, ça n'intéresse pas grand monde d'ailleurs. On se dirige plutôt vers une expression proche des niveaux endogènes que l'inverse ces derniers temps.   [...]

[Biologie Moléculaire] Système d'expression de prot invitro (cell free)

Je dois produire une protéine grande environ 160 kDa avec un système de production transcription / traduction provenant de mais, homme, lapin et bactérie. Me protéine est une protéine de levure.Voilà ce que je pensais faire.  [...] Ma question est la suivante. Quelqu'un a-t-il déjà utilisé ce genre de kit pour un application similaire (grande protéine - GST - et levure) Si oui lequel avez vous utilisé.  [...]

[Biologie Moléculaire] Western sur protéine membranaire

Je cherche a effectuer un western sur un extrait de protéine de levure (donc difficile a casser). cette protéine a la particularité d'etre accrochée et retenue a la membrane vacuolaire (ainsi qu'au RE).  [...] Je fais tous mes western sur une protéine membranaire (mais de cellules humaines et pas de levure) en Laemli (je n'ai jamais su l'écrire) ou d'autres tampons style Guanidium, urée, RIPA,... Ca ne marche pas le Laemli chez la levure Est ce que tu as essayé de casser au dounce.  [...]