• Santé - Problèmes, Extraction, étapes

tampon ATL QIAGEN

Secret commercial non, sérieusement, Qiagen (et autres) n'ont aucun intérêt à donner la formulation exact de leur tampon. Tu peux parfois avoir des indications (comme le type de sel utilisé pour le pouvoir tampon) mais c'est tout. C'est bien sur pour éviter que tu en fasses toi même et que tu achètes chez eux le kit complet (même si tu n'as besoin que du tampon). C'est beau le commerce.   [...] Cependant, si tu as des problèmes pour l'extraction ou autres étapes, tu peux demander conseils par mail (lent) ou téléphone (rapide, ou pas) à leur service technique (ils sont gentils, ils ne mordent pas ).  [...]

Mémoire en génétique : questions diverses

Mon problème concerne surtout l'étape de décodage par le ribosome. cette étape a-t-elle lieu avant que l'ARNt ne se fixe à l'ARNm ou après.  [...] Alors je travaille toujours sur mon mémoire. J'étudie actuellement l'extraction de l'ADN au phénol-chloroforme. J'ai décomposé la procédure d'extraction en quatre étapes.  [...]

[Génétique] Réalisation PCR

Pouvez-vous me détailler les différentes étapes et procédures pour la réalisation d'une Pcr. Novice en travail de laboratoire, je dois réaliser le génotype des lignées de souris et j'aimerais connaitre les différentes étapes auparavant.  [...] Merci pour votre réponse. Je ne suis pas du tout dans ce service en faite je suis animalier à la base et on me demande de réaliser des pcr en complément de mon activité, voilà le pourquoi de ma question.   [...]

[Biochimie] separation des lipide du serum sanguin

voila lors d'un TP nous avons fait l'extraction des lipides a partir du serum sanguin mais voila j'ai quelques questions en ce qui concerne les étapes.  [...] aprés centrifugation on a recupéré la phase chloroformique et on la mis au bain marie pour quoi a quoi va servir le bain marie j'ai cherché sur google mais j'ai rien trouvé aidez moi svp.   [...]

Dégradation des ARNs DNAsés ?

Sinon, ce que tu peux éventuellement faire, c'est un dosage de ta quantité d'ARN après extraction histoire de voir un peu la différence. Deja, tu devrais pouvoir voir si le problème vient d'ici.  [...] Est il possible pour toi de faire une extraction de tes ARN via un kit Qiagen Il n'utilise pas le Trizol et est peut etre moins dégradant. Pour info, je fais mes extractions en kit Qiagen et je passe par l'étape facultative de DNaseI. Je n'ai jamais eu de problèmes personnellement.  [...]

[Biotechnologie] Méthode de purification de l'insuline recombinante

J'aurais besoin de votre aide. Je dois faire un dossier sur la synthèse d'insuline par génie génétique, j'ai pu faire tout le début de mon dossier mais je suis bloquée pour ma partie extraction et purification. Pour l'extraction c'est ok, mais la purification me pose des problèmes.  [...] Je sais qu'il y a beaucoup de méthodes de purification mais je ne sais pas laquelle est la plus adapté pour purifier l'insuline une fois que l'on a obtenu l'extrait protéique (insuline + toutes les autres protéines synthétisées par la bactérie).   [...]

[Biologie Moléculaire] extraction d'ADN plasmidique

Sinon pour les bactéries classiquement utilisées en labo de bio mol (E. coli principalement), de nombreux kits d'extraction de plasmides existent sous les noms mini- (environ 100 mL de culture bactérienne), midi- (250 mL de culture), maxi- (500 mL) ou mega-prep (1L et plus) et sont fournis par des compagnies comme Qiagen.  [...] Digestion enzymatique de la paroi et/ou lyse mécanique des cellules (par exemple avec des micro billes en ver dans un tube que tu vortex en présence des cellules bactériennes). Il faut procéder à cette lyse dans un tampon de lyse contenant notamment de l'EDTA pour protéger le matériel génétique des DNAses et éventuellement des dénaturant protéiques tel que le SDS et le béta-mercaptoéthanol.   [...]

[Biologie Moléculaire] Problème de construction d'une banque d'ADNc

En fait, j'ai vérifié toutes les étapes depuis l'extraction de l'ARN jusqu'au fractionnement... j'ai aussi vérifié la compétence de mes cellules... toujours aucune colonies sur boite.  [...] Pour l'étape de ligation, quelle quantité de vecteur utilises-tu Quels rapports vecteur.insert Quelle quantité de ligase (Unité et volume) Quel volume final représente le milieu réactionnel de ligation Combien de temps incubes-tu A quelle température Quel volume de produit de ligation utilises-tu pour transformer tes bactéries.  [...]

[Biochimie] Calcul des volumes pour extraction d'ADN

après on fait une centrifugation et toutes les étapes d'extraction.  [...] Comment je peux déterminer x et y j'ai pensé à Ci * Vi= Cf * Vf mais cette relation est plutôt pour la dilution.   [...]

[Biologie Moléculaire] Mini/Maxi/Midiprep

Ben la miniprep est en général une extraction rapide de plasmide que l'on ne purifie pas plus que cela. Ca sert au cours des étapes intermédiaires pour faire des vérifications (typiquement quelques digestions de restriction, une PCR).  [...] Evidemment avec les kit que l'on utilise maintenant, les maxi prep sont vites faites et ressemblent à une miniprep. Ceci est du au fait que les kit sont très bien optimisés et facilitent considérablement la purification. Sans eux la maxi prep est lourdingue à faire à la main.   [...]