• Santé - Principe, étapes, Blocage

[Biologie Moléculaire] Technique du Western Blot

Plus précisément il faut saturer les sites de fixation non spécifiques des anticorps, pour éviter d'avoir trop de bruit de fond et plus important, d'avoir du signal non spécifique. C'est globalement le même principe que pour les étapes de blocage en immunohisto.  [...] Complément à mon message d'au dessus, je me rends compte qu'il est plus qu'incomplet. la membrane de nitrocellulose sur laquelle tu as transféré tes protéines est faite pour accrocher toutes les protéines de manière non spécifique, donc si tu incube tes anticorps sans avoir fait au préalable d'étape de blocage ils vont se fixer partout.  [...]

[Biologie Moléculaire] Western blot

J'ai une question qui va sans doute paraître naïve mais tant pis alors la voilà. Dans un Western blot par exemple, il y a une étape après l'électrophorèse dite de blocage qui consiste à saturer (souvent avec de la caséine ou du BSA) les sites non spécifiques, ce que je comprends bien dans le principe.  [...] La nitrocellulose et le PVDF ont des propriétés chimiques leur permettant de fixer avec une haute affinité la plupart des protéines (pour ne pas dire toutes). On peut en quelque sorte les assimiler à une plaque adhésive à protéines. Lors du transfert, les protéines vont du gel vers la membrane et sont alors scotchées à la membrane.   [...]

[Génétique] drosophile déterminisme génétique

La chaîne de biosynthèse du pigment brun comprend plusieurs étapes. chacune d'entre elles taisant intervenir Line enzyme dont la synthèse dépend d'un gène situé sur un chromosome déterminé. Chacun de ces gènes existe sous la forme d'allèles dominants notés (V, Cn, Cd et St) et d'allèles récessifs, inactifs, notés respectivement (v, cn, cd et st).  [...] Le blocage de n'Importe laquelle des étapes de cette chaîne de biosynthèse ou de plusieurs d'entre elles entraîne l'absence de pigment brun et, en conséquence, l'apparition du phénotype yeux rouge vif = [rv].  [...]

[Microbiologie] western blotting

j'ai fait migrer mes protéines par sds page en puits confondus, sur le gel les bandes sont nettes, en faisant le transfert sur membrane de nitrocellulose et après révélation par le 4 chloro1 naphtol je n'ai pas obtenu des bandes pourquoi à votre avis sachant que le transfert s'est bien passé j'ai dilué les anticorps primaires 1/100 et les anticorps secondaires 1/2000 je doute par rapport au titre des anticorps que j'ai utilisé sachant qu'ils proviennent des patients atteints de Mycoplasma pneumoniae qu'est ce que je dois faire.   [...] Le rouge ponceau est aussi pratique pour vérifier qu'il y a bien des protéines sur la membrane, les étapes de blocages peuvent parfois etre problématiques. J'ai parfois observé qu'un blocage plus court améliorait les signaux.  [...]

Grippe aviaire : découverte du talon d'Achille du virus H5N1

Les deux principaux médicaments utilisés aujourd'hui contre la grippe aviaire reposent sur le même principe. le blocage de la protéine neuraminidase (N), qui permet au virus de quitter les cellules déjà infectées et de se propager.  [...] A l'époque où ils ont été conçus, seules les formes N2 et N9 de la neuraminidase avaient été étudiées par cristallographie aux rayons X, et c'est donc tout naturellement qu'on avait octroyé aux médicaments la structure moléculaire adéquate. Les scientifiques avaient ensuite pu vérifier l'efficacité du Tamiflu et du Relenza sur les autres types de neuraminidases, et en avaient conclu que la géométrie du site actif de la protéine ne différait pas d'une forme à l'autre.   [...]

[Biologie Moléculaire] ADNc simple, double brins et PCR

Ce qui m'échappe un peu, c'est à quel moment se fait la synthèse de deuxième brin de l'ADNc et comment la Taq décide ou sait qu'il manque un deuxième brin qu'il faut synthétiser avant de procéder à l'amplification du fragment délimité par 2 amorces présent dans la réaction.   [...] Je ne comprends pas bien ton blocage étant donné que tu sembles avoir compris le principe de la PCR. ADN simple brin ou double brin, cela ne change presque rien pour la PCR, hormis le fait que la première amplification aura lieu sur une seule séquence d'ADN, alors qu'avec de l'ADN double brin on en a deux.  [...]

[Biologie Cellulaire] Synchronisation G1/S par double blocage thymidine

Est ce que certains d'entre vous ont dèjà utilisé un protocole de double blocage avec une transfection entre les deux, sur les cellules Hela. blocage/transfection/re-blocage.  [...] J'ai déjà entendu parler du double blocage thymidine. Mais en considérant que dans une population cellulaire une grande proportion est en G1, pourquoi ne pas transfecter puis induire le blocage thymidine, sans étape de blocage avant transfection... Enfin je suppose que tu y as pensé mais c'est plus ou moins une question que je te pose.  [...]

Définition | Western blot - Immunoblot | Futura Santé

blocage de la membrane. cette étape est indispensable pour limiter les interactions non spécifiques ultérieures entre les anticorps et la membrane. Le blocage est réalisé dans une solution de protéines concentrées.  [...] détection. le principe consiste à appliquer sur la membrane des anticorps marqués qui sont spécifiques des protéines que l'on veut observer. On pourra ainsi observer leur position sur le gel.  [...]

[Biochimie] Devoir de biologie pour demain

Chacun de ces gènes existe sous la forme d'allèles dominants notés V, Cn, Cd, St et d'allèles récessifs notés respectivement v, cn, cd, st. Ces allèles inactifs ne permettent pas la transformation du tryptophane en cinurénine pour v, de la cinurénine en hydroxycinérunine pour cn, de l'hydroxycinurénine en produit X pour cd, du produit X en pigment brun pour st.   [...] Le blocage de n'importe quelle étape entraîne l'absence de pigment brun, et donc l'apparition du phénotype alternatif yeux rouges vifs [rv].  [...]

[Immunologie] Protocole ELISA

Je suis chargée d'imaginer un protocole visant à déterminer la réaction immunitaire d'un poisson ( D. labrax ) face à une infection de parasites branchiaux ( D. aequans ). J'ai pensé réaliser en premier un test ELISA pour savoir si le poisson exprime des anticorps anti-parasite dans son sang.   [...] pour affiner votre protocole, pensez à réaliser une étape de blocage après la fixation de votre antigène au fond du puits.  [...]