• Santé - Pression, Sélection, Antibiotique

[Biologie Cellulaire] transfection

le séquençage étant bon, je pouvais à présent transfecter mes cellules, et donc j'ai préparé des midipreps pour transfecter et là je découvre que je n'ai rien, mon stockage devait être mauvais ou pour une autre raison que j'ignore, mes bactéries ne servaient plus à rien, tout ce que j'avais c'était mes minipreps de départ, alors j'ai lancé ma transfection avec mes minipreps, sachant que le protocol d'extraction des mini differe de celui des midi je ne sais pas ce que ça va donner y en a t il parmis vous qui s'y connaissent.   [...] En fait, tu as déjà du vérifier, mais tu n'aurais pas oublié de rajouter l'antibiotique pour garder la pression de sélection sur tes bactéries Cela arrive à tous le monde (ou de se tromper d'ATB ).  [...]

[Biologie Moléculaire] siRNA, shRNA ??

Juste une dernière précision. lorsque le shRNA est codé dans un plasmide, il n'a pas besoin d'être intégré dans le gênôme de la cellule hôte pôur être stable... Une simple pression de sélection par un antibiotique (par exemple) permet une transfection stable.  [...] De manière générale on préfèrera toujours le siRNA au shRNA. Si tu as un siRNA qui fonctionne bien, le transfecter avant chaque manip' n'est pas d'une grande difficulté. L'utilisation du shRNA suppose de maintenir une pression de sélection par l'utilisation d'un antibiotique, chose qu'on préfère éviter autant que faire se peut pour éviter une perturbation supplémentaire.  [...]

[Génétique] Production d'interleukine 2

Puis tu fais une culture sur boite de petri avec une sélection par un antibiotique correspondant à ton plasmide. De la tu repiques une colonie et tu fait une culture liquide à partir de cette dernière. A cette étape il est important de valider ta construction par un séquençage et une PCR, après avoir extrait une petite quantité de ton plasmide (ex.5ml de culture extrait par mini prep).  [...] Pour produire la protéine à partir de là, il faut que tu réalises une transfection en cellule eucaryote (HEK293 par exemple) en utilisant un agent de transfection (lipofectamine...). Tu appliques également une pression de sélection par un antibiotique. Là il va falloir attendre un peu et comparer la mortalité de tes cellules avec des HEK non transfectées également sous antibiotique.  [...]

[évolution] Théorie de l'évolution?? vrai ou faux... - Page 4

Bon exemple de mauvaise compréhension de la théorie. La théorie n'est pas basées là-dessus. Elle explique comment le vivant évolue en fonction de plusieurs paramètres (mutation, dérive, migrations, et pressions de sélections environnementales et internes cf. la sélection sexuelle).  [...] Le démonstation évolutionniste de cette expérience est facile. boite de pétri = environnement, antibiotique = pression de sélection, survie = mutation (repérable par PCR).  [...]

[évolution][physiologie][embryologie] Mes grandes questions :

J'en doute. Pour moi, dans nos société actuelles, il n'y a pas vraiment de pression de sélection sur le nombre de dents, ou leur taille. Ce qui signifie que les mutations donnant de petites dents, ou des dents moins nombreuses, peuvent apparaître, et se répandre, ou pas.  [...] Maintenant si on repique la culture dans un milieu sans antibiotique, la pression de sélection devient nulle. Le gène de résistance peut alors très bien se retrouver altéré dans une partie de la population bactérienne. Il peut par exemple être dans une zone ou il y a beaucoup de transposons (fragments de gènes récemment gagnés par la bactéries).  [...]

Efficacité d'antibiotiques couplés

La mutation qui confère une résistance est rare et est noyée dans la population non résistante. En laissant évoluer cette population sans pression antibiotique, il y aura très peu de résistance et elle restera sensible aux antibiotiques (sera éliminée lors de son utilisation) tandis que si on les utilise régulièrement, on sélectionne des populations résistantes ( en dehors du foyer infectieux traité ) et on finira par ne plus avoir que des bactéries résistantes.  [...] Oui, les bactéries se multiplient mais comme la résistance ne donne en général pas d'autre avantage sélectif que celui de résister au dit antibiotique et a plutôt un coût pour la bactérie, elle a tendance à disparaitre en l'absence de pression de sélection (le non usage d'un antibiotique).  [...]

[évolution] Théorie de l'évolution?? vrai ou faux... - Page 5

Dans le cas cité, tu fais un cribble (tu selectionnes en fonction d'un caractère, ici la résistance à un antibiotique)... Le caractère résistance à un antibiotique X se trouvait dans la population, après le crible tu n'as plus que celui la... les autres ont été éliminé car ne répondantpas à une pression excercé par le milieu.  [...] Pour chipoter je rapellerais que certaines espèces bactériennes se différencient justement par leur résistance aux antibiotiques.  [...]

[Evolution] L'évolution, j'y crois pas trop, voici pourquoi. - Page 3

Une population de bactéries résistantes à un antibiotique perd cette résistance si la pression exercée par l'antibiotique s'arrête.  [...] Ce que je veux dire, c'est qu'il y a un bon nombre de paramètres à prendre en compte, pas seulement une question de hasard qui tombe bien ou pas. Il faut prendre en compte l'ensemble de la notion de pression de sélection qui intègre le temps, la vitesse de reproduction des espèces, les paramètres de pression extérieure, les notions de génétiques élémentaires comme le hasard des mutations, les différents type de brassage, etc.  [...]

[Génétique] Transfert de matériel génétique chez les bactéries

Dans le contexte du transfert de matériel génétique, un marqueur de sélection est le plus souvent un gène conférant une résistance à un antibiotique défini (par exemple la kanamycine).  [...] En effet, les bactéries qui n'ont pas le marqueur de sélection présent sur le matériel génétique transféré sont sensibles à l'antibiotique et meurent quand celui-ci est ajouté au milieu de culture.  [...]

marqueurs de sélection

Ce gène est appelé marqueur de sélection. Deux types de marquer de sélection sont utilisés chez les levures. des gènes permettant de complémenter une mutation auxotrophique ou des gènes conférant la résistance à un antibiotique ou à un agent toxique.  [...] non tu insère ton gène dans un plasmide qui contient la resistance a la selection (bien souvent un gène de resistance a un antibiotique).  [...]