• Santé - Préparation, Plasmide, Bactérie

[Biochimie] Resistance à la zeocine pourquoi ?

En procédant à l'extraction de l'ADN plasmidique pour controler la presence du plamside recombinant, je n'ai trouvé aucun plasmide et ça m'a intrigué comment est ce possible d'ou est ce qu'elles tiennent cette resistance ce sont pas des bactérie satellite a mon avis selon leur taille.  [...] Bonjour, l'une des possibilités c'est que ta préparation contenant le plasmide soit contaminée par une bactérie résistante à la zéocine.  [...]

isolation d'un plasmide

De plus, lorsqu'on veut transformer une bactérie, vaut il mieux donner un légr choc thermique et une source chimique pour faciliter l'incorporation du plasmide.  [...] Succintement voici les etapes d'une préparation de plasmide. On joue sur le fait que le plasmide soit une petite molécule d'ADN superenroulée.  [...]

coloration negative

On ne colore pas ce qu'on veut voir comme dans une coloration positive mais on va colorer le contour de ce qu'on veut voir afin de le mettre en évidence grâce à un contraste.   [...] Exact, la coloration négative colore toute la préparation SAUF les éléments que tu veux observer, pour te donner un exemple concret, la coloration a l'encre de chine qui est utilisé pour mettre en évidence la capsule d'une bactérie, colore l'ensemble de la préparation et met en contraste la dite bactérie, car l'encre ne pénètre pas la capsule et donc ne rentre pas dans la bactérie.  [...]

[Biochimie] Expression anormale d'une protéine exogène

...) ça changera peut-être quelque chose. Tu as essayé un autre type cellulaire, les Cos par exemple La préparation de plasmide que tu utilises date-t-elle.  [...] Je suis en train d'essayer de faire la même expérience avec des Hela. Ma préparation de plasmide à environ 1 ans mais je fais naturellement des aliquots et mon stock courant n'est pas congelé mais conservé à 4°C. Concernant l'agent de transfection cela n'explique pas pourquoi lors de mes premières expériences je me suis trouvé avec une expression correcte de la protéine et pas par la suite.  [...]

[Biologie Moléculaire] Mini/Maxi/Midiprep

Ben la miniprep est en général une extraction rapide de plasmide que l'on ne purifie pas plus que cela. Ca sert au cours des étapes intermédiaires pour faire des vérifications (typiquement quelques digestions de restriction, une PCR).  [...] On ne fait une maxi (préparation de plasmide bien propre et en grande quantité) que quand on est certain de bien avoir le plasmide que l'on souhaite.  [...]

Bactéries lactiques

Je suis en train de rechercher la préparation sèche d'une bacterie lactique. Streptococcus thermophilus. Il y a quelques process pour secher la préparation microbienne comme. freeze drying, Spray drying. pour la 1ere methode, je vois qu'il y a des cryoprotectant s.  [...] lait écrémé, maltodextrine, starch... et les subtances supplémentaires comme acide glutamique, phophate buffer... Et ma question est quelle la solution est plus efficace pour S.thermophilus pendant la periode de freeze drying.   [...]

[Biochimie] Tpe-Aide-Microbio

Bonjour, dans le cadre de mon TPE, j'aurais voulu savoir si vous saviez ce qu'était l' échelle de Mac Farland, l' ED stérile, une souche pure sur GNi, ainsi qu'une Préparation de l' inoculum durant une identification de bactérie avec une galerie API 20E.  [...] On essaie de mettre en évidence des bactéries présentes dans le lait (streptocoques & lactobacillus) grace à une galerie API 20E. Pour ce faire on met en culture des souche de ces bactérie et dans la préparation de l'inoculum on place dans un microtube (avec 5mL d'eau distillée) une souche pure de la colonie (mise en culture) & une souche pure sur GNi.  [...]

[Biologie Moléculaire] PCR colonie et PCR ADN

C'est peut-être due à l'absence tout simplement de bonne ligation. On me dit que la PCR a peut-être pris en compte des inserts qui seraient parvenus dans les bactéries sans avoir été insérés dans le plasmide.  [...] bête question. vous êtes sûrs que lors de la PCR sur colonie, il n'y a pas de milieu de ligation qui se ballade Genre il y aurait de la préparation contenant le plasmide, avec le plasmide contenant l'insert, qui flotte dans le milieu et donnerait un faux positif en PCR.  [...]

Solution de levure autolysée (LA)

J'utilise solution de LA comme un constituent du milieu pour la croissance d'une bactérie lactique. Après la fermentation, j'obtiens la suspension de cells grâce à la configuration, donc je séches cell-ci par méthode congélé-séché, ma preparation a une couleur pas clair (couleur brune), je pense que ce peut-être à cause de la couleur de la solution de LA, est-ce que vous pouvez m'aider à clarifier cette solution pour obtenir une préparation ayant une couleur bien éclairée.  [...]

[Biologie Cellulaire] Transfection plasmide B-gal sur 3T3

Je dois effectuer une transfection de plasmide B-galactosidase dans des cellules 3T3. Voila le principe de la dernière manip effectuée.  [...] Pour ton plasmide, tu as raison de faire varier ta quantité. Quand tu dis préparation à 0.5µg (3 puits), tu déposes 0,5µg par puits ou bien 0,5µg pour 3 puits Normalement 500ng pour un puits ça suffit, surtout pour la B-Gal.  [...]