• Santé - Précipitation, éthanol, Acétone

[Biochimie] Précipitation des protéines.

Oui ça marche très bien. précipitation dans 4 à 5 volumes d'acétone (minimum 20 min à -20°C), centrifugation pour récupérer les protéines (15000g pendant 10 min) + 2 ou 3 lavages.  [...] Il y'a aussi la précipitation au phénol, PCA (acide perchlorique), le sulfate de zinc ou au tungstate de sodium et la précipitation thermique, mais pour le PCA et le sulfate de zinc et au tungstate de sodium sont dangereux car l'un est explosif(PCA) et le sulfate de zinc qui est une technique un peu complexe, particulièrement si on utilise le Ba(OH) 2 qui doit être conservé à l'abri de l'air.  [...]

[Biochimie] L'acétone à froid dans l'extraction de l'ARN

Oui effectivement je confirme que l'utilisation de l'acétone est fait pour la précipitation des protéines, c'est vraie qu'on utilise généralement l'éthanol pour la précipitation des protéines, maintenant la précipitation à l'acétone est aussi plus efficace car, contrairement à l'éthanol, très peu de protéines sont solubles dans l'acétone.  [...] Si mes souvenirs sont bons, une fois qu'on a une interface claire après les lavages au phénol, on met de l'acétone avec notre solution d'ARN, on la laisse au froid toute la nuit puis on centrifuge longtemps à forte vitesse pour précipiter l'ARN. On obtient alors un culot qui ne contient que l'ARN q'on sèche alors par 1 ou 2 lavages à l'éthanol.  [...]

[Biologie Moléculaire] Nettoyage d'ARNs & Transfert de protéines

1) J'ai des ARNs que je voudrait nettoyer. La DO 260/280 est bonne (. 2) mais je suis apparemment contaminé par les sels du tampon RLT (extraction sur colonne) puisque ma DO 260/230 n'est que de 1,3. Est-ce que vous pensez que ça peut poser un problème pour les envoyer en Q-RT-PCR Et si oui, pour éliminer ces sels, est-ce qu'une simple précipitation à l'isopropanol (+lavages à l'EtOH) suffirait.  [...] J'utilise le kit RNeasy Mini. Il est prévu pour extraire les ARNs à la base mais on peut aussi récupérer les protéines dans le tampon RTL. Il suffit juste de faire une précipitation à l'acétone.  [...]

[Biochimie] Dissolution d'un culot de protéines

J'avais aussi eu ce genre de soucis apres précipitation à l'acétone.  [...] Sinon Amersham (je cite des marques mais c'est ptet interdit ) fait un kit de quantification destiné spécialement à tous ceux qui font les bourrins avec les chaotropes, les détergents etc... Si ça intéresse du monde dans mon labo (kit 500 assays quand meme) je le testerai.   [...]

comment préparer une solution 0,24% p/v d'éthanol?

J'ai un lab où on me demande de préparer une solution contenant 0.24% p/v d'éthanol et 0.12% p/v d'acétone. Puis à partir de cette solution,préparer une dizaine de dilutions pour couvrir uniformément l'intervalle entre 30% et 300% de la limite légale en éthanol qui au Canada est de 0.08% (0,8mg/ml).  [...] pour les dilutions je sais que ma concentration la plus élevée sera de 2.4mg/ml (300%) et la moins concentrée sera 0.24mg/ml (30%) mais je ne sais pas comment faire pour calculer le volume à prélever à chaque fois pour préparer les autres dilutions.   [...]

HPLC sur des protéines déjà dénaturées

Le problème, c'est que ma protéine est déjà dénaturée (avec du SDS entre autre, que j'enlève avec une purification). Et quand j'injecte ma protéine, je n'ai pas de pic, ni dans l'UV, ni en fluorescence dans le gradient, mais juste un tout petit juste après l'injection.   [...] Je n'utilise pas de SDS car on fait de la MS derrière et cela peut être galère, mais je me méfierais tout de même. L'interaction protéine/SDS est tout de même assez forte. Je ne suis pas sûr que tu l'élimines totalement par simple lavage/dialyse. Il me semble que la méthode standard pour éliminer le SDS est de faire précipiter la protéine dans l'acetone.  [...]

Naturopathie ? - Page 2

Après recherche, c'est effectivement dans les dogmes de la naturopathie. un patient est, selon les naturopathes, envahie de toxines provenant de notre alimentation et de notre mode de vie occidental. Ne leur demandez pas de préciser ce qu'ils appellent toxine.   [...] Pour l'odeur, c'était assez étrange. il y avait une forte odeur d'éthanol (normal), avec une odeur que j'identifierai comme à cheval entre l'acétone et le benzène.  [...]

[Biochimie] Casser des aggrégats

En effet, la chaleur induit fréquemment la formation d'aggrégats pour les protéines surexprimées. Je pensais que ces aggrégats étaient visibles dans ton extrait cellulaire mais d'après ce que tu me dis tu les retrouves plutôt sur ton western donc ce n'est pas l'ADN.   [...] Je ne sais pas comment va migrer ton gel avec 6M de guanidine ou 10% de TFE, mais au pire une fois qu'elle est soluble tu peux faire une precipitation TCA ou Acetone.  [...]

Solubilité d'ADN et d'ARN

J'ai une question concernant la solubilité d'ADN et d'ARN.. D'apres ce qu'on m'a dit l'adn est soluble dans l'eau et l'arn dans les solvants organiques comme l'alcool, phénol, chloroforme.. Mais ARN précipité en présence d'alcool mais non pas l'ADN.. Est ce possible Pouvez quelqu'un m'expliquer SVP.  [...] L'ADN et l'ARN ne SONT PAS SOLUBLES dans le phénol, le chloroforme, l'ethanol, l'acétone, l'isopropanol etc... C'est d'ailleurs bien pratique quand on veut les extraire et les purifier.  [...]

western-blot

- soit tu ne prends pas exactement la même quantité pour ta précipitation. essuis ton cône après l'avoir trempé dans ton lysat (avant de le précipiter), surtout si c'est visqueux, et surtout resuspends en aller/retour pendant une bonne minute (je suppose que tu précipites à l'éthanol).  [...] Perso apres precipitation au TCA et lavage a l'acetone, je chauffe 2-3 min a 60°C pour secher le culot, puis je resuspend dans le laemmli et je chauffe encore quelques minutes a 60°C pour bien dissoudre (plus du vortex intensif).  [...]