• Santé - Plasmide, Site, Restriction

Carte de restriction

Combien de sites de restriction avez-vous besoin dans le plasmide A pour générer les 2 fragments de 3000 et 500 bp avec une seule et unique enzyme de restriction.  [...] Idem avec le plasmide B pour générer les 3 fragments, en supposant qu'on utilise la même enzyme de restriction pour les 2 plasmides Où se situe le site de restriction surnuméraire et à quoi cela correspond-il concernant la mutation.  [...]

[Biologie Moléculaire] electrophorèse en gel d'agarose

mais dans ce cas, si je fais agir une enzyme de restriction qui n'a qu'un site de restriction sur le plasmide il faut que la digestion soit complète pour que je n'obtienne que des fragements de même taille et même volume.  [...] Pourquoi parle-t-on de volume Si je coupe en un site de restriction unique, j'aurai une molécule linéaire, càd que mon plasmide circulaire du départ sera devenu linéaire. Là, il n'y a plus de considérations de topologie.  [...]

[Biologie Moléculaire] comment faire une mutation par PCR?

Ce qui permet d'amplifier deux segments qui doivent chacun contenir un site de restriction unique dans le plasmide (attention, différent du site qu'on désire insérer évidemment).  [...] Ce qui permet d'amplifier deux segments qui doivent chacun contenir un site de restriction unique dans le plasmide (attention, différent du site qu'on désire insérer évidemment). La aussi je suis perdue, je comprends pas, l'histoire du site de restriction.  [...]

[Biologie Moléculaire] Clonage avec plasmide

Elles permettent notamment en génie des vecteurs, d'ouvrir un plasmide, et d'y insérer un gène YFG dont les extrémités sont construites pour etre complémentaires avec le site de restriction pour que cela colle pile poil.  [...] on met (on insert) les différents fragment dans un plasmide, et c'est là que rentre en jeu les enzymes de restriction, donc quand on dit que le plasmide a un site de restriction BamH1 cela veut dire que c'est cette enzyme BamH1 qui va cliver un bout du fragment du gène.  [...]

PCR et clonage

on veut cloner une séquence dans un plasmide (pGEM3) coupé par 2 enzymes de restriction (enzymes utilisés pour linéariser pGEM3).mais aucun des sites qui entourent la séquence à cloner n'existe dans le site de clonage de PGEM3.  [...] 2- tu ouvres ton plasmide, soit avec une enzyme qui coupe franc, ou alors cohésive (et tu rempli le site avec la Klenow). puis tu clones directement le produit de PCR (qui est bout franc si tu as utilisé une enzyme fidele).  [...]

[Biologie Moléculaire] Numérotation des sites de restriction

la numérotation correspond au premier nucleotide du site de restriction. Le 0 est généralement donné sur le plasmide. sinon il est pris de maniere arbitraire.  [...] Je n'ai pas compris votre réponse. Je vais essayer d'expliciter ma question. En fait j'ai un plasmide psp72 et un insert pst1 et entre le promoteur sp6 et le site de restriction pst1(l'insert) il y'a un écart ce qui est normal. Mais le site de restriction pst 1 porte le numéro 32 et je n'ai pas compris comment le prof a trouvé ça.  [...]

[Biochimie] pBluescript II KS

Le plasmide KS a le site de restriction pour KpnI proche du promoteur LacZ alors que le plasmide SK a le site pour SacI proche du promoteur.  [...] De souvenir tu dois avoir tous les détails dans le manuel d'instruction.   [...]

compter des cellules/marquer de l'ADN/transgenese

- lors de l'introduction du transgène dans le génome de ma cellule souche grace a un plasmide comment faire pour savoir sur quel chromosome s'est insérer le gène.  [...] Donc concrêtement, tu coupes ton plasmide circulaire grâce à un site de restriction et tu obtient ton plasmide sous forme linéaire qui peut ensuite s'insérer par recombinaison homologue.  [...]

[Biotechnologie] Le clonage

Je suis devant un exercice où je dois donner les différentes étapes me permettant de construire un plasmide recombiné. Celui-ci ayant deux site de restriction CpoI. Je dois y inserer un gène, mais dans la séquence de part et d'autre du gène je n'ai pas de site de restriction.  [...] Je disais qu'il fallait juste amplifier le gène par PCR en ajoutant des sites de restrictions CpoI dans les amorces, digérer le produit de PCR et assembler le tout.  [...]

[Biologie Moléculaire] Plasmide

Je dispose de deux enzymes de restrictions, une XhoI qui possède deux site de restriction dans la cassette de polyclonage. l'autre enzyme est MluI cependant sur le schema du plasmide je n'ai pas son site de restriction donc je ne sais pas ou elle coupe.  [...] oui tu peux, sous certaines conditions. Il faut un site de restriction dans le vecteur, et un autre dans l'insert (pas au milieu de l'insert). Selon que l'insert est dans un sens ou dans l'autre, tu auras deux fragments différents en taille. Pour l'histoire du plasmide natif j'aurais dit que c'etait le vecteur seul.  [...]