• Santé - Plasmide, Promoteur, Intérêt

Ogm

Le gène d'intérêt ne peut être dans le plasmide de part avance. Ce gène d'intérêt doit déjà être une construction composée d'un promoteur venant d'un organisme, du gène qui porte le nom d'intérêt venant d'un autre organisme,et d'un terminateur venant lui aussi d'un autre organisme.  [...] En fait les plasmides existe en plusieurs exemplaires dans la bactérie (selon la taille du plasmide et sont utilité ça peut aller de quelques exemplaires a plusieurs dizaines) mais c est surtout par la multiplication des bactéries que le nombre de plasmides est augmenté ensuite on fait éclater les cultures bactériennes et on récupère les plasmides d intérêt.  [...]

[Biologie Moléculaire] Fournisseur plasmide d'expression (avec ORF spécifique)

J'ai un plasmide gateway (sans promoteur) de chez Invitrogen et je suis déjà en train de faire sortir la séquence pour la mettre dans un pDEST, mais nous avons quelques problèmes.  [...] La question que l'on pose à l'aide de ce plasmide est urgente donc j'aimerai trouver le plus vite possible un plasmide d'expression AVEC PROMOTEUR et l'ORF d'intérêt. J'ai regardé chez Dharmacon, Invitrogen, Qiagen, Eurogentec et je n'ai rien trouvé.  [...]

[Biologie Moléculaire] Clonage dans plasmide

Il n'est pas nécessaire d'introduire dans le plasmide les sites de régulations spécifiques au gêne, car le plasmide (sans le gêne d'intérêt)peut déjà contenir divers éléments dont un promoteur et parfois d'autres éléments régulateurs, cela dépend de l'utilité que tu en as.  [...] On me dit qu'un chercheur a isolé une petite quantité d'une certaine enzyme. Il a ensuite obtenu un clone génomique complet du géne codant l'enzyme, puis il le lia à un promoteur bactérien fort sur un plasmide. Une fois le plasmide introduit dans E.coli, il constata qu'aucune enzyme n'était produite.  [...]

[Biologie Moléculaire] Expression de protéines grâce au pGEX. DH5alpha ou BL21?

Pour l'instant j'amplifie mon plasmide dans une souche de Coli DH5alpha. Instinctivement (après mes aventures dans le monde de la production en pET) j'allais passer sur une souche BL21 peu pratique à utiliser. Puis réflechissant un peu je me suis rendu compte que finalement la souche BL21 n'a surtout d'intérêt pour la production de protéines en pET que parce qu'elle permet l'utilisation du promoteur T7 du plasmide.  [...] J'ai transformé des bactéries DH5alpha avec mon plasmide GST et mon plasmide GST-prot d'intérêt. Pour chaque transformation j'ai effectué un contrôle non induit. J'ai testé deux stragégies d'induction avec 1 mM IPTG. 2h à 37°C ou toute la nuit à 30°C.  [...]

[Biologie Moléculaire] Promoteurs, gènes et plasmides

En fait j'ai un petit soucis, je ne comprend pas le rôle indispensable d'un promoteur pour un gène, en particulier lorsque l'on insere un gene d'interet dans un plasmide vecteur.  [...] Lorsqu'on veut exprimer un gène d'intérêt via un plasmide on utilise des promoteurs dit fort qui on un potentiel transcriptionnel important pour que le gène soit fortement exprimé.  [...]

[Biologie Moléculaire] organisation plasmide

En fait tout dépend de ce que tu cherches à faire et du type de plasmide utilisé. De ce que j'ai pu voir, la plupart du temps on utilise un plasmide contenant un promoteur d'intérêt et on place dans le MCS le gène d'intérêt.  [...] En gros, si tu possèdes le promoteur voulu sur une plasmide du commerce, tu y places seulement le gène et sinon, il s'agit d'une étude beaucoup plus compliquée qu'il me serait difficile de résumer ici.  [...]

Vaccins antigrippaux : la génétique inverse et les cultures cellulaires | Dossier

un plasmide pour la transcription des huit ARN viraux. chacune des huit unités de transcription comprend le promoteur d'origine humaine de pol I, l'ADNc de polarité négative codant un segment du génome viral, et la séquence terminator de pol I d'origine murine.  [...] un système à deux plasmides basé sur pol II. un plasmide pour la transcription de PA, PB1, PB2. chacune des trois unités de transcription contient l'ARNm codant pour la protéine virale, intercalé entre le promoteur de pol II et une séquence de polyadénylation.  [...]

Insertion d'un promoteur sur un vecteur plasmidique

Je t'explique simplement comment on procéderait en recherche, et si dire tu prends la séquence du promoteur et tu la colles dans le plasmide te demande de la réflexion à un point tel que ça en devient intéressant pour toi, alors je ne sais plus quoi dire.  [...] Les exercices de premiers et seconds cycles sont parfois bien éloignés de la réalité de la recherche, or ici Vlper se posait une question pratique, se demandait comment on s'y prendrait dans labo de recherche. moi je prend un plasmide qui a le promoteur voulu et je le modifie... point final.  [...]

[Biologie Moléculaire] Deux questions d'annales PCEM1

Pour cela, vous devez isoler une région spécifique du long transcrit que vous allez pouvoir insérer en anti sens dans un plasmide afin de produire votre ARN anti sens.  [...] Il vous faut l'insérer en sens inverse par rapport au promoteur, il vous faut donc un plasmide. promoteur-BamH1-Pst1. C'est le plasmide P1.  [...]

[Biochimie] pBluescript II KS

Bonjour, j'aimerais savoir que signifie le KS à la fin de PBluescript II KS.   [...] Le plasmide KS a le site de restriction pour KpnI proche du promoteur LacZ alors que le plasmide SK a le site pour SacI proche du promoteur.  [...]