• Santé - Plasmide, Enzyme, Restriction

[Biochimie] nucléase

Tu commences par ouvrir ton plasmide avec une enzyme de restriction, tu fais agir ta phosphatase, et tu peux ensuite tranquillement faire ta réaction de ligation entre ton transgène et le plasmide (et ainsi éviter que ton plasmide ne se referme sur lui-même et d'avoir bossé pour rien).  [...] Admettons voilà ton plasmide ouvert par deux enzymes différentes, une bleue une violette. -PROMOTEUR- site Enzyme de restriction 1 (du vide) site Enzyme de restriction 2 - TERMINATEUR-et on rejoint le promoteur puisque le plasmide est circulaire.  [...]

[Biologie Moléculaire] Gène0 AOX1!!

1) Enzyme de restriction spécifique à AOX1 ainsi qu'au plasmide vecteur de clonage. Donc découpage des deux au bon endroit.  [...] 2) Insertion du promoteur dans le plasmide et reapariment de base car notre enzyme de restriction est spécifique et a couper notre fragment au bon endroit.  [...]

génie génétique

Bonjour à tous, lorsque l'on veut insérer un fragment de restriction dans un plasmide pour pouvoir produire des clones, si ce fragment a 2 extrémités identique il pourrait se combiner avec extrémité du plasmide dans un sens aussi bien que dans l'autre alors comment grâce à enzyme de restriction peut-on choisir dans quel sens on veut que ce fragment se positionne.  [...] donc en gros l'enzyme de restriction coupe le plasmide d'un côté et le fragment de restriction d'un coté, les autres cotés sont intacts et les coté coupés s'emboitent.  [...]

[Biologie Moléculaire] vecteur

j ai une serie 6 enzyme de restriction et on me demande comment faut il preparer le plasmide,par que enzyme de restriction parmi les 6(bsrDIBSALASELECORIBAMHI PSTI),et en fait j aimerai savoir comment voit on quand il y a incompatibilite entre les extremite cohesive d un fragment digéré par une enzyme (dans mon cas c est NDei)et un plasmide ouvert.  [...] On récupère les bactéries par centrifugation. Puis, on perméabilise la paroi bactérienne par un traitement doux permettant d'obtenir un passage en solution des plasmides qui sont plus légers que l'ADN bactérien. La purification des plasmides peut être ensuite réalisée par chromatographie liquide à haute performance ou ultra-centrifugation en gradient de densité.  [...]

[Biologie Moléculaire] mutagènese, transformation, transfection

Ce que je comprends c'est que vous avez fait une mutagénèse dirigée par PCR à partir d'un plasmide X. Pour éliminer le plasmide matrice X vous avez utilisé la spécificité de l'enzyme de restriction DpnI pour les sites méthylés. Ainsi, l'enzyme a digéré le plasmide matrice, produit en bactérie (donc méthylé) et pas le plasmide produit par PCR, non méthylé.  [...] Pour vérifier une mutagénèse sur un petit insert (d'un ordre de grandeur inférieur au 10Kb) le plus simple est de faire quelques restrictions et un séquençage. Vous n'avez pas fait de séquençage du Bluescript.  [...]

[Biologie Moléculaire] Utilisation de Klenow

Je voudrais juste savoir si je peux utiliser la klenow directement apres ma restriction sans inactiver au prealable l'enzyme de restriction et sans purifier le plasmide linearise a partir d'un gel.  [...] il faut inactiver l'enzyme préalablement, sinon elle va continuer a couper. Pas besoin de purifier le plasmide, tu peux le faire ensuite. Il faut quand même que la klenow puisse fonctionner dans le tampon utilisé pour la digestion.  [...]

[Génétique] Question qui me tracasse beaucoup ( information génétique )

L'ADN recombinant le but est de prendre un gène (ou une version-. allèle) et de le multiplier afin de pouvoir dans un second temps travailler dessus (séquencage par exemple). Donc à l'aide d'enzymes de restrictions qui reconnaisses certains sites (suite de nucléotides) on va couper le plasmide afin d'insérer notre gène.  [...] Il n'y a pas d'incohérence puisque le gène recombinant est obtenu grâce à la même enzyme de restriction que celle qui sert à ouvrir le plasmide. La séquence ADN d'intérêt s'insère donc dans celle du plasmide par complémentarité de ses extrémités avec celles du plasmide.  [...]

[Biologie Moléculaire] Clonage avec plasmide

on met les différents fragment dans un plasmide, et c'est là que rentre en jeu les enzymes de restriction, donc quand on dit que le plasmide a un site de restriction BamH1 cela veut dire que c'est cette enzyme BamH1 qui va cliver un bout du fragment du gène.  [...] on met (on insert) les différents fragment dans un plasmide, et c'est là que rentre en jeu les enzymes de restriction, donc quand on dit que le plasmide a un site de restriction BamH1 cela veut dire que c'est cette enzyme BamH1 qui va cliver un bout du fragment du gène.  [...]

Carte de restriction

Combien de sites de restriction avez-vous besoin dans le plasmide A pour générer les 2 fragments de 3000 et 500 bp avec une seule et unique enzyme de restriction.  [...] Idem avec le plasmide B pour générer les 3 fragments, en supposant qu'on utilise la même enzyme de restriction pour les 2 plasmides Où se situe le site de restriction surnuméraire et à quoi cela correspond-il concernant la mutation.  [...]

[Biologie Moléculaire] enzyme de restriction

est il possible d insérer un fragment d adn dans un plasmide linéarisé par une enzyme de restriction non palindromique.  [...] sinon on peu toujours remplir ou grignoter les extremités ce qui les rends franches et permet le clonage de n'importe quoi.   [...]