• Santé - Plasmide, Enzyme, Hybride

Vecteur de clonage, PCR et vecteur d'expression

Je pense Nhyma que tu as une fausse notion du double hybride car il ne sert pas a verifier la presence d'une enzyme, et n'a rien a voir avec le substrat de l'enzyme.  [...] Non parce que le plasmide dans lequel tu vas cloner ton enzyme ne sera pas le même que celui que tu vas utiliser pour faire du double hybride donc ça ne sert à rien car.  [...]

[Biologie Moléculaire] Principe des banque génomique/cDNA

lyse de la bactérie, récupérer le plasmide et le fragment du gène qui s'hybride avec la sonde.  [...] On ne parle pas de dégradation par des enzymes de restriction, mais de digestion. La différence est quand même notable. avec le terme dégradation je signifie le fait que je pars d'une macromolécule (ADN) pour me retrouver avec des nucléotides à la fin. Alors que le terme digestion signifie que je vais couper à certains endroits pour me retrouver avec des fragments de tailles différentes.  [...]

[Biologie Moléculaire] technique d'hybridation moléculaire

.En fait y'a pas eu de conjugaison,j'ai réalisé une digestion d'ADN avec cette enzyme et une migration PFGE,ensuite j'ai hybridé mes fragments avec les sondes.  [...] je suis désolée mais j'ai pas compris la définition exacte d'un mini chromosome...est -il toujours présent dans le génome et pourquoi on considére pas que cette bande correspond à un plasmide par exemple.  [...]

X-gal

le X-gal est le substrat de la beta gal, il ne permet donc pas de mettre en évidence une autre enzyme. en revanche son application peut aller au dela, notamment en cas de technique de bouble hybride.  [...] par contre, toute enzyme supplémentaire apporte un avantage sur les autres bactéries. notamment en cas de compétition trophique.  [...]

[Biologie Moléculaire] test de paternité

Mes cours de biologie moléculaire sur le sujet étant enfouis dans les tréfonds de mon cerveau, quelqu'un pourrait-il me rappeler la différence (s'il y en a une) entre micro et minisatellite.   [...] Bonsoir. Si hybridation avec la sonde se fait avec fragment clivée par l'enzyme de restriction, au moment de la détection, la position des traits indiquera que le père ou la mère ( selon le brin avec lequel la sonde s'est hybridé) à donné ce chromosome a l'enfant.  [...]

Séquençage de l'ADN

S'il s'agit bien du plasmide oui elle s'hybride sur un seul des deux mais ensuite ce brin de plasmide (un des deux) peut fixer les deux brins à séquencer et du coup on séquencera des fois l'un des fois l'autre, c'est ce que je veux dire. Et sans savoir lequel on séquence.  [...] S'il est obtenu par PCR, ou par digestion enzymatique (sauf blunt) par exemple, on sait dans quel sens il sera inséré dans le plasmide. Si on fait du séquençage total (comme WGS par ex), on s'en fout un peu puisqu'il y aura, après reconstitution, des séquences codantes sur les deux brins.  [...]

Polymerase Chain Reaction

Ensuite a 60°C on hybride des amorces sur nos deux brins et a 72°C on introduit une enzyme -la taq polymerase- qui a partir des amorces va synthétiser les brins complémentaires. On se retrouve donc avec deux ADN bicaténaire donc 4 brins au total, on a doublé notre quantité d'ADN et on est prêt pour un nouveau cycle. Souvent on fait une petite trentaine de cycle.  [...] Non le FISH et la PCR sont deux techniques très différentes et n'ont pas les mêmes objectifs mais utilisent tout les deux une hybridation. La PCR a pour but d'amplifier la quantité d'ADN pour le quantifier par exemple. Le FISH consiste a hybrider une sonde fluorescente complémentaire d'une séquence particulière dans le but de détecter des anomalies chromosomiques, par exemple si tu ne détectes un signal fluorescent que sur un chromosome pour la séquence qui t'intéresse dans un organisme diploïde cela signifie que la séquence a subit une délétion sur l'autre chromosome. Cela permet donc de faire des diagnostiques.  [...]

Enzyme Taq polymérase et réaction de PCR

J'aurais une question concernant la réaction de PRC. On utilise 2 amorces une sens et une anti-sens pour délimiter la séquence spécifique à amplifier. Chacune des alors s'hybride sur un brin après dénaturation du double brin. Puis L'enzyme Taq polymérase rajoute les désoxynucléotiques complémentaires, mais comment sait-elle quand elle doit s'arrêter.  [...] mais au cycle d'après, c'est l'autre amorce qui s'hybride sur le brin néosynthétisé et la Taq va dans l'autre sens, jusqu'à l'endroit ou l'amorce du cycle précédent s'était fixée.  [...]

[Biologie Moléculaire] Pcr

C'est simple. l'amorce s'hybride partiellement, la partie qui contient le site de restriction et qui est donc indépendant de la région à amplifier dépasse.  [...] Mais d'aprés ce que j'ai compris, c'est sur cette partie de l'amorce en trop ou qui ne s'hybride pas qu'on insère un site de restriction. Donc à cet endroit là, comment l'enzyme de restriction va t'elle couper si elle ne peut le faire que sur une région double brin et que le site de restriction correspond justement à une zone non hybridée ou simple brin.  [...]

système de double hybride

Alors, dans l'ordre. Dans une levure classique, les gènes GAL4 sont normalement présent. Mais dans la levure qui est utilisé, les gènes codant pour les protéines GAL4 sont apportées par un/des plasmide(s). Le gène rapporteur est normalement déjà présent, mais il peut également être apporté.  [...] On a deux protéines d'intérêt humaine, PCR-1 (appat) et AST-1 (proie) que l'on étudie au laboratoire. On a leur séquence ADN (ADNc) sur un plasmide. Et on pense qu'il y a interaction de ces deux protéines dans la cellule humaine (colocalisation). On veut donc vérifier s'il y a réellement une interaction direct entre ces deux protéines, et pour cela on utilise les système double hybride.  [...]