• Santé - Plasmide, Clonage, ADN

[Biologie Moléculaire] Vecteurs navette

Vecteur de clonage. est un plasmide ayant une réplication autonome dans la cellule hôte et un site multiple de clonage afin de cloner un fragment d'ADN d'intérêt.  [...] Yep. Les vecteurs navette possèdent les deux types d'origine de réplication (procaryote et eucaryote) ce qui leurs permet de passer d'un type de cellule à l'autre.   [...]

Définition | Génétique | Futura Santé

Chez l'Homme, le noyau cellulaire contient 23 paires de chromosomes. chaque individu possède un lot de chromosomes provenant de son père et un lot provenant de sa mère. Chez les eucaryotes, tout le génome n'est pas dans le noyau. mitochondries et chloroplastes contiennent aussi de l'ADN.  [...] Au laboratoire, de nombreuses techniques de biologie moléculaire permettent de manipuler et d'analyser les gènes. utilisation d' enzymes de restriction, clonage de gènes dans un plasmide, production d'ADN par PCR, séquençage de l'ADN.  [...]

[Biologie Moléculaire] Manque de fiabilité crible Blanc-Bleu

Je suis en L1 Bio et doit faire un CR de TP sur un clonage de fragments d'ADN du phage Lambda par le plasmide pBluescript.  [...] Enfin il y a aussi des faux négatifs, c'est à dire des clones bleus qui peuvent contenir l'insert car cet insert n'empeche pas la synthèse de la b-gal.   [...]

[Biologie Moléculaire] Problème de ligation

LA seule solution trouver est de sous cloner ton fragment dans un plasmide (genre pBC-SK) à un site franc. C'est simple et rapide car tu as une selection bleu /banc. Ensuite tu ressors ton insert par HindIII et tu le clones dans ton plasmide final.  [...] Refait le clonage à partir de ton fragment sorti de PCRTopo mais sans déphosphorylé ton plasmide. La CIP ou la shkink abime parfois les extrémités de l'ADN rendant impossible toute ligation.  [...]

[Biologie Moléculaire] PCR et Clonage

s.v.p j'aimerai bien comprendre la différence entre la PCR et le clonage autrement dit est-ce-que lors d'une amplification de l'ADN le choix entre une PCR et le clonage se fait d'une manière aléatoire ou bien y'a des règles a suivre.  [...] La PCR permet d'amplifier une portion d'un génome d'ADN selon les amorces que tu choisis. Le clonage consiste à insérer un morceau de gène à l'intérieur d'un ADN.. (souvent dans celui d'E.coli via un plasmide, dit vecteur).  [...]

[Biologie Moléculaire] Clonage

J'ai besoin d'aide pour un clonage. Je dois cloner un fragment d'ADN génomique bactérien dans un plasmide. La stratégie choisie est de linéariser le vecteur par digestion enzymatique, de le purifier sur gel, de le déphosphoryler et de faire la ligation avec l'insert.  [...] Et je bloque à cette étape. j'obtiens autant de clones pour mes bactéries transformées par le vecteur linéarisé que par celles transformées par le plasmide natif. J'en ai donc déduit une mauvaise digestion. Or, j'utilise les enzymes Fast Digest de chez Fermentas pour une digestion o/n.  [...]

[Biochimie] Linker, enzyme de restriction and co

Un polylinker est une région d'un plasmide contenant plein de sites de restriction, souvent uniques. Ce sont ces divers sites qui sont reconnus par les enzymes respectives. Tu peux rencontrer aussi le terme MCS, pour Multiple Cloning Site (ou Site de Clonages Multiples).  [...] Beh même si tu mets 3L de ligase, tu n'auras pas de clonage Excepté le cas où une recombinaison peut se produire entre une région du plasmide et l'insert et à condition que l'ADN linéaire que représente ton insert ne soit pas détruit, tu pourras éventuellement avoir un truc recombinant.  [...]

Hybridations plasmides et sondes

Le reel clonage se situe en amont de la premiere manip. Il correspond en fait a une manipulation de l'ADN (en vue de l'insertion dans un plasmide par exemple). Evidemment, suite a ton clonage tu auras besoin de transformer des bacteries puis de verifier ton clonage (manip 1, 2 et 3).  [...] Je ne pense pas que tu puisses utiliser un phage à la place d'une bacterie pour faire du clonage dans la mesure ou justement, le phage necessite une bacterie pour se developper. Tu peux utiliser des phages pour faires des banques d'ADNg, parce que ces derniers ont la capacité d'integrer une grande quantité d'ADN dans leur capside, ce qui n'est pas le cas des plasmides.  [...]

[bio mol] pUC et LacZ

on intègre un fragment d'adn dans ce plasmide pUC. ensuite on l'introduit dans une bactérie et l'importance des sites de réplication du pUC va permettre un clonage important du fragment d'adn souhaité.  [...] Sur le plasmide pUC, on a donc le gène LacZ. Quand on fait le clonage, on va faire en sorte que le gène d'intérêt s'intègre dans le plasmide AU MILIEU du gène LacZ.  [...]

Technique ADN recombinant

1)Ce que je ne comprend pas c'est que une fois que l'adn à été intégré dans le site de clonage sur le plasmide il fait en sorte que la beta-galactosidase n'est pas produite par lacz du moins pas une beta-galactosidase fonctionnelle.  [...] 2) pour le puC19 qui contient un mcs (multiple cloning site) comment se fait-il que le mcs qui consiste donc en des séquences spécifique de nucléotides si j'ai bien compris ne perturbe pas la lacZ vu qu'il est en plein dans le gène si j'observe bien l'image suivante ( je joins l'image).   [...]