• Santé - Plasmide, Cellules, Mammifères

[Biologie Moléculaire] Purification d'un plasmide à partir de cellules mammifères??

Pensez-vous qu'il soit possible d'isoler et purifier un plasmide (EBV = pas d'intégration et expression à long terme sous sélection) à partir de mes lignées cellulaires transfectées.  [...] Essayes de faire une miniprep sur tes cellules, comme on le fait pour les bactéries. Le problème est que les tampons risquent de ne pas être adapté pour cette situation et rien donner comme production. Je ne vois que cette solution en tout cas car les extractions d'ADN classique ne séparerons pas le plasmide de l'ADN génomique alors que les kit mini-, midi- et maxiprep le permettent...pour les bactéries.  [...]

[Biologie Moléculaire] Plasmide

Dans ta dernière question, je suppose que tu suggère d'intégrer un plasmide dans une cellule eucaryote et de le garder en tant que tel, c'est à dire qu'il ne s'intègre pas au génome. Je pense que c'est possible de façon spontanée chez S. Cerevisiae. Pour des cellules de mammifères, cela nécessite qu'elles soient au préalable transformées avec l'antigène T de SV40, comme c'est le cas pour les cellules Cos-7.  [...] Cet antigène permet au plasmide d'être répliqué par la cellule, et donc d'être conservé pendant une période plus longue. Sauf exception, la présence de cet antigène est absolument nécessaire dans les cellules de mammifères pour qu'il y ait réplication d'un plasmide.  [...]

Transformation/inativation d'un gène

Chez les cellules de mammifères normales il n'y a pas de plasmide et pourtant tu peux très bien faire de l'expression plasmidique.  [...] Ok, don si j'ai bien compris je construis mon plasmide avec les extrémités du mon gène a déléter, plus un gène de sélection, et après il faut transfecter ce plasmide donc le champignon.  [...]

[Génétique] exprimer une protéine dans E.COLI

Mais, tu va devoir modifier ton transcrit d'ADN c de départ pour par exemple utiliser les ARNt que la bactérie utilise le plus souvent, et aussi, tu peux, par PCR, ajouter une séquence à ton plasmide permettant de secréter la protéine dans l'espace périplasmique ou extracellulaire.  [...] il n'y a pas de plasmide replicatif pour les cellules de mammiferes. Au moins tu fais de l'expression transitoire, sinon tu utilises des vecteurs viraux.  [...]

[Biotechnologie] Clonage Eucaryote

Concernant le clonage de cellules eucaryotes, est ce possible qu'une cellule de mammifère accepte un plasmide et le réplique comme il faut ou ce plasmide (contenant le gène étranger) doit il absolument être intégré au génome cellulaires.  [...] Voilà, j'ai ecrit que pour la production de protéines dans des cellules de mammifères, il fallait utiliser un plasmide contenant un site polyA, une origine de réplication virale ainsi qu'un promoteur de type viral.  [...]

[Journal club] Extinction de l'expression de gènes par les siRNA : la découverte

découverte de l'épissage), a eu la brillante idée d'introduire directement des petits ARN interférents (siRNA) dans les cellules de mammifères en culture pour induire l'extinction (knock-down) de gènes cibles. Cela avait été montré chez d'autres espèces avec des ARN double brin (dsRNA), mais les tentatives étaient vouées à l'échec chez les mammifères.  [...] En conclusion, les auteurs orientent les futures recherches sur les mécanismes d'ARN interférence dans les cellules de mammifères et introduisent aussi la possibilité d'utilisation de cette méthode simple dans les laboratoires et le développement thérapeutique.  [...]

[Biochimie] ARN interférent

Chez les mammifères, en ARN interférence on est obligé d'utiliser des siRNA ou des shRNA qui sont en plutôt des plasmides codant pour des shRNA. On ne peut pas utiliser de dsRNA chez les mammifères sinon cela induit une réponse appelée la réponse interféron qui est un système de défense des cellules de mammifères contre les virus à ARN.  [...] La réponse interféron induit la dégradation de l'ensemble des ARNm de la cellule. Donc la spécificité est nulle. Voilà pourquoi on utilise les siRNA et shRNA sur ces cellules qui eux permettent de cibler spécifiquement la dégradation d'un ARNm particulier.  [...]

influence des peptides signaux sur la sécrétion des protéines

2 mg/ml, ça me semble déjà pas mal en cellules de mammifères. Peut-etre que tu as une proteine naturellement difficile à replier (protéine de plus de 40 à 50 kDa, beaucoup de ponts disulfures, peu de structures secondaires,... ) et que quelque soit le peptide signal que tu rajoutes, tu arriveras à une expression assez faible de toute façon.  [...] Mais à 2 mg/ml, tu peux déjà quasiment tout faire ce que tu veux, même si c'est assez fastidieux en cellules de mammifères (2 mg/ml en cellules de mammifères, j'ai déjà donné et c'est vrai que c'est rapidement lourd). A la rigueur, ça peut valoir le coup de tenter en baculovirus, la production sera meilleure, mais il y a un risque d'aggrégation dans le cas d'une glycoprotéine.  [...]

[Biologie moléculaire] Protocole électroporation cellules mammifères

[Biologie moléculaire] Protocole électroporation cellules mammifères.  [...] Je suis à la recherche d'un protocole efficace d'électroporation de cellules de mammifères (plus particulièrement des cellules de type murine C2C12).  [...]

Sérum-albumine : le tabac pourrait servir de planche de salut

La sérum-albumine humaine (SAH), un composant du plasma sanguin, joue un rôle crucial dans le maintien de la pression sanguine et le transport des minéraux et hormones. À l'heure actuelle, la demande de cette substance indispensable en chirurgie, pour la déshydratation, les maladies hépatiques ou rénales, ou encore les hémorragies, dépasse les 500 tonnes par an - quantité presque totalement issue de dons de sang.  [...] Étant donné que les réserves commerciales de plasma sanguin ne suffisent généralement pas à couvrir la demande, les chercheurs se sont tournés vers d'autres moyens de produire la SAH, notamment à partir de cellules de levure, de mammifères ou de végétaux.  [...]