• Santé - Plasmide, Cellule, Origine, Réplication

[Biologie Moléculaire] conversion d'un plasmide

J'aimerai savoir si il était possible d'ajouter une origine de réplication et tout de suite après un marqueur de sélection afin de pouvoir sélectionner des clones.  [...] tu peux songer a foutre une origine de réplication virale type SV40 par contre je sais ce que ca donne en système de production.  [...]

[Biochimie] Clonage vecteur navette sur la levure

En fait, le passage en bactérie te sert à amplifier la quantité de plasmides, pour être certain que, lors de ta transformation, de l'ADN entrera effectivement dans la cellule.  [...] Dans le cas du plasmide, tu peux vouloir, ou non l'intégrer au génome ou bien le laisser autonome dans la cellule s'il dispose de sa propre origine de réplication.  [...]

Définition | Plasmide | Futura Santé

Un plasmide est une molécule d' ADN circulaire double brin, qui possède obligatoirement une origine de réplication, afin qu'il puisse se répliquer de manière autonome dans la cellule et un gène de sélection pour qu'il ne soit pas perdu par l'organisme au fil des multiplications cellulaires.  [...] Dans la nature, les plasmides sont des morceaux d' ADN qui peuvent se transmettre par transfert horizontal, de cellule en cellule. S'il porte un gène d'intérêt ( résistance à un antibiotique par exemple), c'est un avantage certain pour les cellules qui le possèdent.  [...]

[Biologie Moléculaire] Décision de replication de l'ADN

Il y a deux cas possibles. soit le plasmide contient une origine de réplication reconnue par la machinerie de la Levure et dans ce cas on aura une prolifération des cellules l'ayant, soit le plasmide n'en contient pas et les cellules ne survivront pas.  [...] En s'appuyant sur ces informations, on a démontré ces topologies au niveau des ARS portées par différents plasmides (Brewer et al., Cell, 1987) et on a établi que les ARS sont bien des origines de réplication. (Je passe très vite ici pour deux raisons. 1.  [...]

[Biologie Moléculaire] Clonage dans plasmide

Si ce n'est pas le cas, est-ce que ceci est du au fait que certains génes ne sont actifs que si leurs sites de regulation sont occupés Si ces sites de regulation ne sont pas également intégrés dans le plasmide, le géne ne s'exprimera pas dans la cellule hôte.  [...] Sinon pourquoi un plasmide linéaire ne sera jamais transcrit par la cellule Est-ce que c'est lié à l'origine de replication du plasmide.  [...]

[Biologie Cellulaire] Vecteur d'expression transitoire

Oui il y a expression de ton plasmide sans séquence Ori car cette séquence est nécessaire pour la réplication du plasmide et c'est une origine de réplication procaryote lorsqu'on fait des expressions transitoires car on produit les plasmides chez E. coli. Pour initier la transcription on utilise la plupart du temps le promoteur fort du cytomégalovirus (CMV) que l'on place en amont de la séquence codante.  [...] Et dernière chose, pour la production des plasmides dans des bactéries, il ne faut pas qu'une origine de réplication procaryote (Ori) mais aussi des séquence codant un ou plusieurs gènes de résistance à des antibiotiques (habituellement 2) pour sélectionner les bactéries qui ont intégré le plasmide dans un milieu de culture contenant les antibiotiques.  [...]

[Biotechnologie] Clonage Eucaryote

Concernant le clonage de cellules eucaryotes, est ce possible qu'une cellule de mammifère accepte un plasmide et le réplique comme il faut ou ce plasmide (contenant le gène étranger) doit il absolument être intégré au génome cellulaires.  [...] Oui mais pour utiliser un plasmide dans une cellule de mammifères, faut il alors qu'il y a ait une origine de réplication de type virale ainsi qu'un promoteur type viral.  [...]

[Biologie Moléculaire] siRNA, shRNA ??

Bien sûr mais la pression de sélection ne permet que de sélectionner les plasmides intégrés et les plasmides épisomaux répliqués. Dans ce dernier cas, il leur faut une origine de réplication exploitable par la cellule transfectée, comme par exemple un plasmide contenant l'origine de SV40 avec les cellules COS-7 qui possèdent l'antigène T nécessaire pour répliquer les plasmides contenant cette origine.  [...] Oui je rejoins LXR sur ce point, en dehors du cas bien particulier des vecteurs épisomaux, la pression de sélection va permettre de selectionner les cellules qui ont intégré le plasmide, sinon celui-ci est perdu au fur et à mesure des divisions cellulaires.  [...]

Carte plasmide pcDNA 3.1

Je sais que les ori servent à initier la réplication, mais je croyais qu'un plasmide se répliquait d'un seul coup et toujours à partir du même endroit, donc pourquoi il y a 3 ori différentes (SV40ori, pUCori, f1ori) Et SV40pA qu'est ce que c'est.  [...] SV40ori sert d'origine de réplication dans certaines cellules eucaryotes, c'est-à-dire que si on l'insert dans E.coli il ne va pas s'exprimer Mais si le plasmide doit se répliquer dans une bactérie la réplication va commencer à pUCori ou f1ori Je ne comprends pas pourquoi il y a plusieurs origines.  [...]

[Biochimie] Manipulation de l'ADN: plasmide

je suis actuellement en première année de licence en biologie et nous avons étudié les plasmides mais je n'ai pas tout compris notamment sur la carte de réstrction. Quelle est son principe et qu'est ce qu'un site de réstrction, une origine de réplication, un promoteur et un terminateur.  [...] Le plasmide étant constitué d'ADN tu as besoin d'une origine de réplication afin de permettre aux polymérases de le reproduire dans la bactérie. Si le morceau d'ADN ajouté code pour une protéine, la présence d'un promoteur et d'un terminateur te permettra d'activer la production de la protéine à partir du plasmide.  [...]