• Santé - Plasmide, Aide, Niveau

principe de transformation des levures?

Si c'est ça le principe est pas trop compliqué,tu introduit un plasmide bactérien modifier compartant le géne que tu veux introduir dans ta cellule qui aurra préalablement était rendu perméable grace à un tampon ( enfin je crois que c un tampon. non).  [...] pour ceux qui est du plasmide l'introduction du géne se fait a l'aide d'enzymes de restriction spécifique qui coupe ton plasmide au niveau des séquence souhaiter et tu peux ainsi introduir ton géne.  [...]

[Biochimie] Linker, enzyme de restriction and co

Après, il s'agit de cas divers. Disons que si tu clones un insert dont chaque extrêmité a été générée par une enzyme différente (par exemple, EcoRI et BamHI), tu fais pareil au niveau du plasmide receveur (au niveau de son MCS justement ) et tu ligues à l'aide de la ligase.  [...] Beh même si tu mets 3L de ligase, tu n'auras pas de clonage Excepté le cas où une recombinaison peut se produire entre une région du plasmide et l'insert et à condition que l'ADN linéaire que représente ton insert ne soit pas détruit, tu pourras éventuellement avoir un truc recombinant.  [...]

[Biochimie] Travaux pratiques de biochimie des systemes integrés urgents

En général juste pour la fluorescence tu transfecte la cellule avec un plasmide contenant la protéine d'interet suivie de la GFP (ou EGFP pour les eucaryotes je pense) Il s'agit d'une construction à faire à l'aide par exemple d'un plasmide EGFP dans lequel tu insères ta séquence d'interet (mais les manips sont longues, il faut compter un mois au moins).  [...] Le protocole de ceci comprend une première PCR pour produire ton gène d'interet à l'aide de primer possédant des extrémités suplémentaires contenant un site de restriction semblables à ceux présents sur ton plasmide EGFP.  [...]

digestion PCR

Bonjour tout le monde, j'ai besoin de votre aide. J'ai un problème avec mon gel.  [...] Après avoir digéré mon insert (un produit PCR avec 2 amorces) et mon vecteur (un plasmide extrait par miniprep) avec 2 enzymes de restriction, je voit sur gel 3 bandes au même niveau. J'ai utilisé un plasmide (extrait de la miniprep) non digéré comme contrôle qui était à un niveau un peu plus bas des autres. Est-ce que c'est normal.  [...]

Genes dans l'ADN

Et denda, je vient de me rendre compte qu'on s'est mal compris au niveau du liquide. Je m'explique. Lorsqu'on fait une manipulation génétique avec base des bactéries, on prend un bout de gène de sur un chromosome que l'on sectionne à l'aide d'enzymes de restrictions.  [...] Ensuite on prend un plasmide (qui se trouve effectivement dans le cytoplasme ) et toujours à l'aide des enzymes de restrictions, on ouvre le plasmide de sorte qu'au lieu d'avoir une forme plus ou moins ronde il a maintenant la forme d'un C. Par la suite on met le bout de gène que l'ont a sectionnée plus tôt et le plasmide dans une sorte de liquide.  [...]

[Biologie Moléculaire] clonage petit fragment d'ADN

Le plasmide est déphosphorylé à l'aide d'une thermosensitive phosphatase alkalyne qui est elle-même désactivée à la chaleur.  [...] Fais tu une transformation contrôle avec l'insert seul déphosphoré + ligase Y a-t-il autant de colonies que dans plasmide + insert.  [...]

[Biologie Moléculaire] PEG principe

j'ai réalisé un stage de biologie moléculaire, mon but était d'inserer un intron dans un plasmide. plusieurs essais de ligation ont été réalisés dont un à l'aide de PEG (polyéthylène glycol). J'aimerai connaître le principe du PEG lors d'une ligation. J'ai fait plusieurs recherches et je n'ai toujours pas compris comment cette macromolécule peut favoriser le contacte entre le plasmide et l'insert.  [...] voici un petit lien vers une ancienne section du forum qui devrait te satisfaire.   [...]

[Biologie Cellulaire] Dominant négatif

bonjour tout le monde, est ce que quelqu'un peut m'expliquer comment ça marche concrètement une expérience de dominant négatif j'ai ma lignée cellulaire ou je veux éteindre ma protéine, je les transfecte à l'aide d'un plasmide contenant la séquence mutée et je la trouve ou cette séquence et le plasmide ça s'achète ma question est peut être bête mais je n'ai jamais fais ça alors j'ai besoin d'éclaircicements, merci.  [...] Plus il y a de dominant négatif, moins il y aura de phosphorylation du substrat (c'est comme pendant les soldes, plus il y a de personnes qui veulent le même article que toi, moins tu auras de chance de l'avoir).   [...]

[Biologie Moléculaire] Vecteur d'expression

Je suis nouveau ici et j'ai déjà une question à vous poser concernant les vecteurs d'expression. Ma question est pour quelle raison on introduit un gène(lacI) codant pour l'enzyme répresseur au niveau du plasmide alors que ce gène est déjà présent au niveau du chromosome de la bactérie.  [...] Du coup, le gène est placé en aval d'un promoteur inductible. Ici, c'est le promoteur de l'opéron lactose qui est exploité. En présence de glucose, le gène transfecté ne sera pas exprimé par tes bactéries car lacI réprimera la transcription.   [...]

[Biologie Moléculaire] Problèmes: Recombinaison d'un plasmide

Lorsqu'on rajoute une séquence à un plasmide (à l'aide d'un PCR), cette nouvelle séquence à 50% de chance d'être bien placé et 50% d'être inversé. (cf. photo).  [...] Proposez une méthode pour que ce rendement soit de 100% (pour qu'il y'ait toujours des plasmides avec la séquence dans le bon sens).  [...]