• Santé - Plaque, Solution, Anticorps

[Divers] Contenu "Matériels et méthodes" - rapport stage M1

Après transfert, la membrane est bloquée dans une solution de lait 5% TBS-Tween 0,2% pendant 1 heure à température ambiante sous agitation. Elle est ensuite incubée avec les anticorps primaires anti-BRCA1 monoclonal (D9) dilué au 1/500 (Sigma®), anti-HSP60 monoclonal (CK) au 1/1000 (Sigma®) pendant une nuit à 4°C sur une plaque rotative.  [...] Après 3 lavages dans du TBS-Tween 0,2%, la membrane est incubée pendant 1 heure en présence de l'anticorps secondaire anti-IgG de souris couplé à l'HRP (Horse Radish Peroxidase, Cell Signaling) dilué au 1/5000 dans du lait 5% TBS-Tween 0,2% sous agitation.  [...]

[Immunologie] Test Elisa

Pour ce faire on a coaté la plaque avec des anticorps polyclonaux de chèvre, on a lavé puis on a mis notre solution d'Ac de souris de concentration x, on a de nouveau lavé puis enfin on a mis des Ac anti-Ig de souris couplés à la peroxydase.  [...] Oui pour l'autre question tu as raison, l'anticorps de détection utilise son site de reconnaissance de l'antigène, qui est quoiqu'il arrive dans la partie variable, pour reconnaitre le déterminant antigénique correspondant qui lui va être situé dans la partie constante de l'autre anticorps.  [...]

[Immunologie] ELISA coating et conservation

Le souci avec la congélation, c'est que lorsque vous allez décongeler votre microplaque, il y a de forte chance que votre anticorps coaté soit dénaturé ou fortement détérioré.  [...] Je dilue 1 000 fois mon anticorps avant utilisation, je mets 200 µL dans chaque puits, j'incube (selon le moment où je veux récupérer les plaques) soit 3h à 37 °C, soit 4h à 27 °C, soit toute la nuit au frigo (4 °C).  [...]

[Biochimie] Purification de protéine pour ELISA

Mon principal problème (outre mes connaissances très limitées en biochimie) est que mon laboratoire dispose de relativement peu de moyens, et que je ne peux donc pas faire des anticorps adaptés à la carte. Je ne dispose que d'un seul anticorps (polyclonal) capable de se liguer à elle (A), et d'un seul anticorps conjugué (B, polyclonal aussi) qui reconnaît l'anticorps A.  [...] Mais comme l'anticorps A est utilisé 2 fois, j'ai peur que le conjugué ne se fixe aussi aux Ac A coatés à ma plaque mais sur lesquels ma protéine ne s'est pas fixée, et que du coup j'aie à peu près le même signal partout.  [...]

[Biologie Moléculaire] BSA et saturation

Maintenant, dans le cas d'ELISA, elle servirait à empêcher les interactions non-spécifiques des anticorps avec les bords des plaques qui sont très hydrophiles. Donc, durant la première étape, tu laisses ton antigène se fixer au fond des plaques. Puis tu ajoutes la BSA afin de combler les espaces vides.  [...] Et ensuite tu ajoutes les anticorps primaires. Ainsi, les anticorps ne peuvent plus se fixer au fond de la plaque via une interaction non-spécifique.  [...]

[Immunologie] Elisa

le test en sandwich. d'abord tu coat ta plaque avec un anticorp par ex, ensuite tu rajoute ton antigène, puis enfin tu rajoute un autre anticorps qui va se fixer sur un autre épitope de ton antigène. le signal corespon a la concentration de ton antigène.  [...] le test par comptition. tu as coaté ta plaque avec un anticorps, mai la tu rajoute 2 antigène qui vont etre en compétition avec ton anticorps. sur l'un de tes Ag il y en aura un de concentration connu et marqué et l'autre sera celui recherché X. plus il y a de signal moin il y a d'AgX recherché.  [...]

dosage immunologique

Dans un deuxième cas, tu peux aussi détecter des anticorps. Dans ce cas, tu coates ta plaque avec la cible de ces anticorps, par ex une protéine virale.  [...] A un certain niveau du test, il y a d'autres anticorps antiHCG (dirigés contre un autre épitope). Ces anticorps sont eux fixés sur une matrice. Ils vont réagir avec le deuxième épitope de la HCG et cette interaction est plus forte que la force de capillarité.  [...]

[Immunologie] test Elisa

Par exemple, tu peux pré-incuber ta protéine d'interet avec son anticorps (tu la neutralise en quelque sorte) pour ensuite déposer ce mélange sur ta plaque avec l'anticorps coaté au fond du puits. Ainsi tu vérifies que tu as bien un résultat négatif et que ton anticorps est bien spécifique de ta protéine.  [...] - dans le puits HBs Bk, l'HBs de l'échantillon va majoritairement (voire totalement) se fixer au Ac de ta solution de neutralisation et non pas sur les billes. L'Ac complémentaire couplé PhA se fixe au complexe Ac/HBs soluble mais pas (ou peu) aux billes. Le champs magnétique permet de ne conserver que les billes magnétiques et d'éliminer les complexes solubles.  [...]

[Biologie Moléculaire] Concentration ADN plus élevé au picogreen qu'aux UV (spectrométrie)

[Biologie Moléculaire] Concentration ADN plus élevé au picogreen qu'aux UV (spectrométrie).   [...] Par la suite, je prend 2 ul de cet ADN dilué que je met dans un plaque noire et j'y ajoute 198ul d'une solution de picogreen 1X (au départ le picogreen est 200X, je prépare donc une solution 1X avec du TE 1X).  [...]

Les causes du cancer ? - Page 2

Car on aboutit à rien de moins que la solution aux expressions de pathologies dégénératives. cancer, schizophrénie, sclérose en plaque, elsheimer, parkinson.  [...] Fantasme habituel de la solution à plein de truc en même temps (au Moyen-Age y avait l'orviétan, maintenant on a les gogothérapies).  [...]