• Santé - Phosphate, Migration, Protéine

[Biochimie] Modifications post traductionnelles et électrophorèse !

Il y a la théorie mais après il y a la pratique. Moi sur mes Western, quand je regarde ma protéine, j'ai deux bandes. une qui est la forme normale, une autre très légèrement au-dessus qui est la forme hyperphosphorylée...La phosphorylation retarde la migration électrophorétique, c'est illogique car, comme tu l'as dit, le phosphate apporte deux charges négatives.  [...] Le shift de phosphorylation est du à l'encombrement stérique du phosphate qui perturbe et retarde la migration de la protéine modifiée, dans le gel.  [...]

Protéine avec bcp de résidus acides migre de façon aberrante en western blot

J'ai vraiment l'impression, via les différents papiers sur Nrf2 ou sur d'autres protéines, que la raison de cette migration aberrante est la forte proportion d'acides aminés acides dans la séquence. Mais je ne comprends pas pourquoi ces aa acides engendreraient une migration plus lente.  [...] Il serait bon pour toi de revoir tes cours de biochimie. Où as-tu vu qu'une sérine pouvait adopter une conformation particulière Dans une protéine, une séquence peut adopter une conformation mais pas un acide aminé seul. D'autre part, seule la phosphorylation de la sérine pourrait diminuer la migration de la protéine car un groupement phosphate est encombrant.  [...]

[Biologie Cellulaire] swiss prot

La plupart des protéines phosphoryllées shiftent juste au dessus de la forme non modifiée car le phosphate perturbe la migration de la protéine dans le gel. donc le shift n'est pas dû à un réel changement de poids moléculaire.  [...] J'aurai aimé savoir en quoi le phosphate va perturber la migration Par là j'entend est-ce que le phosphate intéragit avec le gel d'une quelconque manière.  [...]

[Biologie Moléculaire] kinase

Quelqu'un a t'il une idee de la difference de migration electrophoretique provoquee par l'ajout d'un seul phosphate sur une proteine.  [...] Exact, meme si tu peux trouver un certain nombre d'exemples dans la litterature de simple phosphorylation qui provoque un changenment de migration. Ca depend aussi de la taille de ta proteine.  [...]

Généralités sur la protéine Kinase C | Dossier

C'est à ce niveau que vient se fixer le nucléotide donneur de phosphate qu'est l' ATP et le substrat qui est une protéine acceptrice de phosphate. Ils sont reliés entre eux par la région V3 qui sert de charnière et qui peut subir une protéolyse par l'action de la calpaïne (Azzi A.  [...] Pour l'activité catalytique, l'ATP se fixe sur la région C3 et le substrat sur la région C4. L'enzyme est alors capable de transférer le phosphate en &gamma. de l'ATP sur une sérine ou une thréonine de la protéine à phosphoryler (fig.9).  [...]

[Biochimie] Malachite Green Phosphate Assay kit, avez vous déjà utilisé ce kit?

Je travaille sur une protéine qui hydrolyse le phosphate, il s'agit d'une actine like... je dois trouver une méthode pour doser le phosphate au cours du temps... mon plus gros souci c'est que ma protéine polymérise en un cart de tour est pour arriver à la purifier sous forme stable (mais pas longtemps.  [...] donc au final je me retrouve avec une protéine qui contient déjà du phosphate, ce qui veut dire le test de dosage de phosphate va etre fausser à cause de la présence de l'ADP.  [...]

[Biologie Moléculaire] Beta actine : contrôle interne en PCR

Pour info on utilise aussi classiquement la beta-2-microglobuline (B2M), la protéine ribosomale 18S (RP18S), l'hypoxanthine-guanine phosphorybosyltransferase (HPRT, préférentiellement pour des neurones) la glyceraldehyde 3-phosphate dehydrogenase (GAPDH), la 2 Glucose-6-Phosphate Dehydrogenase (G6PDH) ou encore l'histone H2A.  [...] A l'époque où je faisais pas mal de quantification relative en PCR temps réel, j'utilisais les essais TaqMan prêts à l'emploi commercialisés par Applied Biosystems, qui marchaient très bien.   [...]

Signalisation cellulaire

J'aurais voulu savoir ce que l'on entend par signalisation cellulaire.   [...] Ces signaux intracellulaires correspondent frequement a des cascades de phosphorylation de proteines. C'est a dire qu'une proteine va se voir ajouter un phosphate, son activite augmente, elle va elle meme ajouter un phosphate a une autre...etc.  [...]

[Biologie Cellulaire] Protéine à activité tyrosine kinase + protéine à actvité théonine/sérine kinase ??

Une protéine kinase est une enzyme qui va transférer un groupement phosphate sur une autre protéine. Une protéine a activité tyrosine kinase devra être phosphorylée ou non phosphorylée pour être active ou inactive. La voie de map kinase permet la phosphorylation d'une protéine par activation successive de kinases (ex.  [...] insuline/glucagon). RAS est un proto-oncogène (empêche la division incontrôlée des cellules) c'est une GTPase qui influence de nombreux processus cellulaires par l'action de kinase. Une mutation d'un gène ras (changement d'interaction avec les prots kinases) peut permettre la formation de tumeurs.   [...]

Définition | Protéine G - GTPase - Protéine liant le GTP | Futura Santé

La protéine G est une GTPase. elle est aussi appelée protéine liant le GTP. Lorsque le GDP est remplacé par un GTP, la protéine change de conformation. Le GTP est hydrolysé en GDP + phosphate inorganique ( Pi ). Le changement de conformation de la protéine lui permet d'interagir avec les protéines effectrices de la cascade de transduction du signal.  [...] la voie de l'adénylate cyclase, une protéine membranaire qui fabrique de l'AMPc et qui est activée par la fixation de la sous-unité &alpha. de la protéine G,  [...]