• Santé - Phase aqueuse, Supérieure, Tube

[Biologie Moléculaire] extraction ARN

les 18S et les 25S apparaissent mais avec une faible intensité, et j'ai une bandes en bas en sous du marqueur qui parait très intense est ce qu'il s'agit de contaminations ou d'ADN j'ai essayer de faire un traitement DNase la bande disparaît mais les 18 et 25S sont presque invisible,   [...] 6. Transférer (500µl) de la phase aqueuse supérieure dans un nouveau tube et ajouter 500µl d'isopropanol. Mélanger à la main doucement pendant 5 minutes.  [...]

Un complexe anticorps-polymère pour isoler rapidement les cellules souches

L' isolation des cellules souches a lieu dans un tube à essai contenant deux phases insolubles, du polyéthylene-glycol pour la phase organique et du dextran pour la phase aqueuse. Le lot de cellules à trier et le complexe anticorps-polymère sont ajoutés au tube, et le tout est mélangé et chauffé.  [...] Le complexe adhère uniquement aux cellules souches et les entraine dans la phase organique supérieure, tandis que les autres types de cellules demeurent dans la phase aqueuse.  [...]

Pureté de l'ADN

J'imagine que vous faites une extraction au phénol/chloroforme, que vous récupérez la phase supérieure, et que vous précipitez l'ADN ensuite.  [...] Il s'agit de récupérer la phase aqueuse dans un tube propre, d'ajouter 1 volume de chloroforme, vortex, centri, et on récupère la phase aqueuse pour précipiter. Juste une étape supplémentaire.  [...]

[Biologie Moléculaire] Tampon de lyse extraction ADNg

Ensuite le volume à ajouter sur tes cellules est variable suivant le nombre de cellules, pour un nombre de cellules. 3.10^7 ajoute 0,3 ml de tampn de lyse et 1 ml si tu effectue ton extraction sur plus de cellules. Il te suffit ensuite d'incuber tes échantillon 12 à 18h à 50°C sous agitation dans des tubes bien fermés.  [...] Après tu ajoute 1volume équivalent (0,3 ou 1 ml suivant le nombre des cellules) de phenol/chloroform/alcool isoamylique. Centrifuge 10 min à 1700g. Après tu transfert la phase aqueuse dans un nouveau tube et tu ajoutes 1/2 volume d'acétate d'ammonium 7,5M et 2 volume d'éthanol 100%, l'ADN devrait précipité immédiatement.  [...]

[Biologie Moléculaire] les ARNs et extraction

Autre p'tites questions. dans ce TP on n'a pas utilisé de phénol (élimine les protéines). Dans ce cas dans la phase aqueuse on a donc de l'ARN et des protéines, nan Ou alors la dénaturation des protéines par la guanidine fait que les protéines ne sont plus dans la phase supérieure.  [...] Car nous avions que 2 phases (la phase rose guanidine et la phase aqueuse)et une interface. De plus l'interface c'est de l'eau ou du chloroforme normalement la phase inférieure c'est le chloroforme, mais pourquoi cette phase est de la couleur de la guanidine.  [...]

[Biologie Moléculaire] solubilité ADN, ARN dans le phénol

L'extraction d'acide nucléique est quelque chose de nouveau pour moi alors je cherche des infos. Aux vues de ce que j'ai trouvé sur le net, avec du phénol acide, il semble assez clair que l'ARn est dans la phase aqueuse et que l'ADN soit dans la phase phénolique (avec des traces dans la phase aqueuse).  [...] En revanche, pour l'extraction d'ADN avec du phénol basique, c'est pas vraiment clair. Des sites comme http.//www.chups.jussieu.fr/polys/bi...Y.Chp.7.3.html disent que l'ARN et l'ADN sont en phase aqueuse (mais dans ce cas, qu'est ce qui élimine l'arn) mais sinon, implicitement, on pense que l'ARN est dans la phase organique (d'où la purification différentiel des acides nucléiques en fonction du pH).  [...]

[Biologie Cellulaire] protéines dans la phase organique?

J'aurai voulu savoir si quelqu'un aurait pu m'eclairer sur le fait que les proteines lors d'une extraction au phenol chloroforme migrent dans la phase organique alors qu'elles sont le plus souvent cytosolubles... Ne devraient elles pas se retrouver dans la phase acqueuse.  [...] Moi j'ai fait une extraction éthanol/chloroforme sur un broya de foie et les protéines étaient bien dans la phase supérieur aqueuse.  [...]

[Biologie Moléculaire] extraction faible qté ARN

POur la derniere question avec le chloroforme, la reponse est oui on en perd un peu car quand tu prends le surnageant, mais tu reprends jamais tout, sinon il y a un enorme gros risque de prendre des proteines presentes a l'interphase.  [...] POur la derniere question avec le chloroforme, la reponse est oui on en perd un peu car quand tu prends le surnageant, tu reprends jamais tout, sinon il y a un enorme gros risque de prendre des proteines presentes a l'interphase.  [...]

[Biologie Moléculaire] extraction d'ARN

En ce qui me concerne je pratique la technique du TRIzol INVITROGEN et ensuite je traite la phase aqueuse soit par la précipitation à l'isopropanol soit par passage sur colonne Qiagen avec ou sans carrier (vu qu'il y a très peu d'ARN dans le plasma comparé à des cellules ou des tissus).  [...] J'ai dû mal m'exprimer, je sais que le trizol ne permet pas de les séparer, mais qu'il lyse seulement les cellules. Au labo dans lequel je suis on m'a pourtant expliqué que le colorant présent dans le trizol était soluble dans les solvant organique, ce qui fait qu'il se retrouve en bas (puisque visuellement j'ai bien une phase organique rose), que l'anneau du milieu représentait l'ADN, et la phase aqueuse en haut regroupait les ARN.  [...]

phenol:chloroforme bizarre?

1- Ajouter phe.chl. isoamyl. à l'achantillon, mélanger, centrifuger. Prélever la phase aqueuse. Y ajouter du chl, centrifuger. Prélever la phase aqueuse. Précipiter l'ADN.  [...] 2- (le bizarre) Ajouter le phe, mélanger, centrifuger, et prelever la phase aqueuse. Ajouter chl.isoamyl. et précipiter (c'est la que ca coince, non).  [...]