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[Biochimie] electrophorese

Par contre, si tu ne connais pas ta structure oligomérique de ta protéine, bah il faudra couplé cette SDS-PAGE par une chromatographie gel d'exclusion qui lui détermine la masse moléculaire mais de ta protéine entière (étant donné qu'on n'est pas en condition dénaturant avec le gel d'exclusion).  [...] PS. quelques précisions pour interpréter un gel, chaque bande constitue une sous-unités protéique, bien sur, il faut voir si ta protéine a des ponts disulfure et que durant la manip, il y a eu utilisation d'un agent réducteur (le beta-mercaptoéthanol qui réduit les ponts disulfure).  [...]

[Biologie Moléculaire] Techniques de Biochimie Moléculaire

Je cherche 2 techniques de biochimie moléculaire pour pouvoir mettre en évidence une molécule à la fois, en tant que tétramère et séparées en 4 monomères. J'ai trouvé l'éléctrophorèse, qui, selon les conditions (dénaturantes ou non) nous prouve qu'une protéine est un tétramère mais l'autre technique m'échappe.  [...] Oui en effet, la chromatographie d'exclusion, pourquoi n'y avait-je pas pensé plus tôt.$. Je pensais à une même méthode qui faisait les deux ça doit être ça et la seule était la SDS Page.  [...]

[Biochimie] Chromatographie d'exclusion sur colonne !

On a réalisé en TP une chromatographie d'exclusion sur colonne pour séparer 2 protéines (thyroglobuline, grosse protéine incolore et cytochrome C, moyenne protéine de couleur rouge) et un sel.  [...] Il est probable que ton cytC soit a la limite de la taille d'exclusion, ce qui fait qu'une portion de ta protéine va etre retenue dans la colone, ce qui fait que ton pic s'étale sur plusieurs fractions.  [...]

[Biochimie] Purification de protéine pour ELISA

J'aimerais avoir quelques critiques de biochimistes sur une idée de protocole pour la purification préliminaire d'une petite protéine en vue d'un dosage ELISA.  [...] Si c'est le cas, je pensais alors faire une purification préalable de ma protéine par chromatographie, sachant que j'ai pas mal d'infos dessus, notamment sa taille exacte (~15 kDA) et son pI (~9). Je pourrais par exemple enchaîner.  [...]

[Biologie Moléculaire] Volume d'elution en chromatographie

Je suis en train d'étudier la chromatographie d'exclusion et je n'ai pas compris certains termes. Je dois calculer un coefficient de partage et, pour cela, j'ai besoin de connaître le volume mort Vo (qui est le volume compris entre les billes du gel), le volume d'élution Ve de ma protéine d'intérêt et le volume total Vc.  [...] Sachant qu'il existe une relation linéaire entre le logarithme de la masse moléculaire d'une protéine et le coefficient de partage pour différentes protéines.  [...]

[Biochimie] chaine polypeptidique

Dans une électrophorèse, c'est un peu compliqué, il faut être en condition dénaturante (avec du SDS par exemple) et utiliser du beta-mercaptoéthanol qui est un agent réducteur des ponts dissulfure. Cela va permettre de complètement dissocié la protéine. Cependant, selon ce que vous connaissez, il y a plusieurs démarches.  [...] - Soit vous ne saviez pas grand chose sur le fait que c'est un homo ou hétéromère (les sous-unités de même poids moléculaire se superpose au même Rf de migration) et vous deviez coupler cette expérience avec une chromatographie d'exclusion qui lui n'est pas en condition dénaturante et cela permet de connaitre la masse moléculaire totale de votre protéine où vous pourrez en déduire le nombre de sous-unité.-D.  [...]

chromatographie / électrophorèse

Tout dépend de ce que tu veux faire. une électrophorèse sépare tes protéines en fonction de leur taille. Quant à la chromatographie il faut préciser, car tu as des chromato d'exclusion filtration sur gel (Sephadex) qui permettent la séparation en fonction du rayon de Stokes (et donc indirectement de la taille), chromato d'affinité qui permet de concentrer ton extrait protéique, chromato échangeuse d'ions qui sépare en fonction de la charge de la protéine etc.  [...] Avec une électrophorèse simple tu sépares tes protéines en fonction du poids moléculaire uniquement. Avec une chromatographie selon le solvant utilisé il me semble que tu peux séparer tes protéines en fonction de leurs charges. Je pense que ça doit être pour cela que tu utilise ces 2 méthodes.  [...]

[Biochimie] Chromatographie d'exclusion stérique : deux pics pour une seule enzyme

J'ai un petit problème de compréhension. J'ai purifié une enzyme tout d'abord par chromatographie d'affinité puis par chromatographie d'exclusion stérique, et le chromatogramme pour cette dernière montre deux pics. Or, l'analyse des fractions obtenues pour ces deux pics par SDS-page montre bien qu'il s'agit de la même enzyme car même masse moléculaire. Est-ce parce-que l'enzyme possède deux formes.  [...] en y réfléchissant, je ne vois pas d'autre explication évidente que celle que vous proposez... pouvez vous tester l'activité enzymatique sur ces deux fractions.   [...]

Déterminer état de dimérisation d'une protéine

Voilà lors d'un travail de recherche, je souhaitais faire cristalliser une protéine. Pour se faire j'ai exprimé et purifié celle-ci. La dernière purification est une size exclusion afin d'avoir un échantillon mono-dispersé. Sur le graphe de ma SEC, je peux voir un premier pic qui sort rapidement, un second un peu plus tard et autre directement après.  [...] Normalement le premier pic de ton chromatogramme, c'est tout ce que tu n'as pas purifié avant de faire la size-exclusion. Les deux pics suivants, ça dépend un peu de ton échantillon.  [...]

[Biochimie] Domaine de fractionnement d'un gel !!!

En fait, dans la chromatographie d'exclusion les petites molécules peuvent pénétrer dans les billes poreuses et les grosses molécules ne le peuvent pas. C'est pourquoi, les petites molécules ont un temps de rétention plus important que les grosses molécules qui elles sont exclues.  [...] Autrement formulé. lors de l'interpretation d'un spectre de chromatographie d'exclusion moléculaire, qu'on on obtient un pic seulement, on dira qu'on a élué une protéine seulement mais comment intérpréter l'augmentation de la Do et sa diminution.  [...]