• Santé - Normalisation, Quantité, Protéine, Western

[Biochimie] Normalisation de la quantité de protéine Western Blot

[Biochimie] Normalisation de la quantité de protéine Western Blot.  [...] Pourriez m'expliquer comment on fait pour normaliser une quantité de protéines lorsqu'on réalise un western blot, je sais qu'il faut utiliser des protéines comme la béta tubuline mais techniquement on fait comment.  [...]

[Biochimie] Normalisation de la quantité de protéine Western Blot chez E.COLI

Normalisation de la quantité de protéine Western Blot chez E.COLI.  [...] je voudrai connaitre quelles sont les protéines chez E.coli qu'on utilise pour pouvoir normaliser une protéine d'intérêt (comme l'actine chez les eucaryotes).  [...]

[Biochimie] Petite question sur le Western Blot

D'autre part lorsque tu feras ta normalisation en western tu la feras sur une 3 ème protéine C indépendante de A et de B, et à priori le niveau de C reste constant (c'est le principe d'une protéine de normalisation). Donc en faisant le ration A/C tu devrais avoir une vision réelle de l'effet de ta drogue.  [...] Maintenant si on prend le cas où c'est justement sur la protéine B que tu normalise la protéine A (imaginons que l'actine bouge, comme cela arrive dans certains lignées), tu vas voir une augmentation de B seule et c'est un résultat en soit. ta protéine de normalisation est modulée par ta drogue.  [...]

western blot, protéine phosphorylée et protéine totale?

Ensuite t-JNK signifie total-JNK, tu en as besoin pour déterminer une quantité de protéine phosphorylée. On ne peut pas vraiment dire que ce soit un contrôle interne. Si tu étudie la phosphorylation d'une protéine il te faut bien montrer quand tu fais une time course que l'a phosphorylation augmente sinon ça ne veut rien dire.  [...] Finalement GAPDH est lui un contrôle de charge, tu peux faire actine ou tubuline, c'est juste pour montrer que tu as loadé sur ton gel la même quantité de protéine. Ca sert à la normalisation.  [...]

[Biologie Moléculaire] normalisation western blot après fractionnement cellulaire

[Biologie Moléculaire] normalisation western blot après fractionnement cellulaire.  [...] Je fais un fractionnement cellulaire et j'obtiens la fraction cytosolique, membranaire, nucléaire et cytosquelettique. Ensuite je fais un western blot pour ma protéine d'intérêt dans chacune de ces fractions mais pour pouvoir la quantifier, je cherche une protéine contrôle pour normaliser mes résultats dans les fractions cytosoliques et membranaires en premier lieu.  [...]

Housekeeping gene (gene de ménage)

Oui mais est ce que justement on pourrait faire une normalisation, en se disant qu'une certaine quantité d'ADN génomoque correspondrait à une quantité de cellules donnée dans chaque échantillon.  [...] Ce que j'ai envie de faire c'est de d'amplifier un gène de ménage (spécifique à l'Homme) dans un volume d'échantillon de sang donné puis amplifier le même gène dans le même volume d'échantillon de selle, puis faire une normalisation par dilution des quantités d'ADN. Qu'en pensez vous.  [...]

Quantification d'ADNc après une reverse transcription

J'ai arrêté de normaliser avec un gène de ménage (ca n'a aucun sens à mon avis). En théorie, le fait de partir d'une quantité d'ARN constante est une normalisation suffisante.  [...] En tout cas pour les manips futures, je suis bien tenté d'appliquer la méthode de 5ng d'ARN initial par point. Mesurer la quantité de cDNA me parait plus introduire un biais supplémentaire qu'autre chose.  [...]

[Biologie Moléculaire] quantitative/real time PCR quelle différence?

Il n'y a pas besoin d'etre quantitatif vu qu'a la base l'urine doit etre sterile. De plus quantifier sous entends normaliser les echantillons, utiliser un gene de menage, une gamme de quantification, des oligos parfaits etc... -. complique et sans interet.  [...] Merci pour toutes vos réponses. Si j'ai bien compris, la PCR en temps réel (après reverse transcription dans ce cas) repose sur la détection de la fluorescence à chaque cycle à l'aide d'un thermocycleur et elle peut être quantitative (normalisation de la quantité d'ARN de départ dans tous les échantillons, choisir un gène de ménage, réalisation de gammes.  [...]

[Biologie Moléculaire] Interprétation PCRq en temps réel (SYBER Green)

Le nombre de copie permet de revenir à une sorte d'unité internationale, car à partir des conditions expérimentales qui peuvent varier d'un manipulateur à l'autre (quantité d'ARN de départ, conditions de qPCR, mix utilisés etc...) les Ct peuvent varier. Après une normalisation par un gène de ménage défini et/ou l'utilisation d'une gamme étalon, on s'affranchit de ce genre de problème.  [...] L'utilisation en PCR des séquences ITS (ADN) dites universelles ont la même utilité que les séquences 18S (ARN) en RT-PCR, à savoir valider la présence d'ADN dans ton échantillon, leur qualité, et éventuellement normaliser tes dépôts. C'est un contrôle positif.  [...]

[Biochimie] Problème avec mon western

J'ai un souci avec mon western blot sur SDS-Page, la migration et le transfert se sont bien déroulés, la première révélation de ma protéine d'intérêt s'était nickel.  [...] un pour la protéine d'intérêt, un pour le témoin de dépôt (actine dans ton cas). Bien entendu, cela n'est pas optimal pour la normalisation par le témoin de dépôt, mais si le dépôt est bien homogène entre les deux gels et que le volume est déposé avec précision, c'est valable.  [...]