• Santé - Niveau, Expression, Protéine, Cellules

[Biologie Cellulaire] Etudier l'expression d'une protéine entre différentes cellules.

J'aimerai savoir si quelqu'un aurai un conseil quand à une technique permettant d'approcher au niveau d'une seule cellule l'expression d'une protéine, afin de pouvoir comparer par exemple, des cellules en périphérie de la culture (plus grosses, densité plus faible) à des cellules centrales (petites et denses).  [...] pour suivre l'expression de la protéine tu peux faire un extraction purification de la proteine dans les deux cellules séparément puis tu fait un blotting ( westerne blot pour suivre le niveau d'expression de la protéine c'est-à-dire la quantité de la protéine dans les deux cellules).  [...]

Quel test statistique utiliser?

Je cherche a détecter une différence significative du niveau d'expression d'une protéine entre des cellules transfectées et non transfectées. Pour cela, j'ai réalisé un lysat cellulaire, et fait migrer mes protéines. J'ai par la suite comparé le niveau d'expression de cette protéine en question par mesure de l'intensité des bandes.  [...] Ainsi je possède deux bandes, l'une de la protéine ds cellules transfectées et l'autre de la protéine des cellules non transfectées. Je voudrai maintenant savoir s'il existe unedifférence significative entre ces deux bandes... Est- ce faisable.  [...]

[Biologie Moléculaire] Méthodes d'étude de l'ADN

On voit sur le contrôle (des cellules Hela du laboratoire) une bande majoritaire détectée, qui a une taille d'environ 35kDa (le marqueur de taille n'est pas dans l'image ici), et qui correspond vraisemblablement à notre protéine. Mais on observe également une petite bande au dessous, et plusieurs bande au dessus (60-70kDa).  [...] Finalement, ces cellules doivent exprimé la protéine SC35 et la protéine SC35GFP (fluorescente, au cas où ). La GFP faisant 27kDa, la protéine SC35GFP doit donc faire environ 27+35=62kDa. Et l'on observe réellement une bande supplémentaire forte (car expression intense) et du même niveau environ que la protéine native, que l'on observe également à 35kDa.  [...]

Une maladie immunitaire rare soignée par thérapie génique

Le syndrome de Wiskott-Aldrich est un déficit immunitaire complexe rare et sévère d'origine génétique lié au chromosome X. Sa prévalence est estimée à 1 sur 250.000. Il est dû à des mutations du gène codant la protéine WAS (WASp) exprimée dans les cellules souches hématopoïétiques (c'est-à-dire les cellules à l'origine de toutes les lignées de cellules sanguines).  [...] Après transfert de gène, les patients ont montré une amélioration clinique significative liée à la restauration de l'expression de la protéine WASp dans les cellules du système immunitaire et les plaquettes. L'efficacité du traitement d'un tel déficit pour lequel un niveau de correction élevé des cellules souches hématopoïétiques est requis, indique qu'il est désormais légitime d'espérer traiter d'autres maladies génétiques complexes comme celles affectant les globules rouges.  [...]

Quel test statistique utiliser?

Il s'agit d'une part de protéine de cellules transfectée et d'autre part de protéine de cellules non transfectée. Je voudrai savoir si la transfection affecte de niveau de cette protéine. Mais mon échantillon ne contient qu'une seule série de mesure.  [...] Je voudrais comparer le niveau d'expression d'une protéine entre des cellules transfectées et non transfectées. Pour cela j'ai réalisé un lysat cellulaire et fait migré mes protéines pour détecter ma protéine d'intérêt. J'ai par la suite quantifie l'intensité des bandes.  [...]

ubiquitine et protéasome

si apres inhibition du proteasome, le niveau d'expression cellulaire de ta proteine est plus grand, tu pourras passer a l'etape suivant (ubiquitinylee où comment).  [...] Je t explique la manip. Enfait je suis entrain de créer le vecteur de clonage permettant de surexprimer la protéine permettant de capter une autre pour l'envoyer au protéasome. Est ce que tes inhibiteurs peuvent s utiliser sur des cellules S2+ Est ce que tu penses que si je transfecte ce vecteur dans ces cellules en presence d'inhibiteur et que je marque ma prot soit disant dégradée je pourrais par cette methode confirmer ou pas sa dégradation.  [...]

Du sang obtenu à partir de cellules de peau

La protéine correspondante OCT4 est un facteur de transcription connu pour être exprimé précocement dans les cellules embryonnaires. Suivant son niveau d'expression, il permet d'établir et de conserver une pluripotence, ce qui fait de lui un des acteurs majeurs dans la création de cellules souches pluripotentes induites.  [...] Dans le cas des fibroblastes reprogrammés en cellules sanguines, et grâce à une régulation fine de son expression, aucun signe de pluripotence n'a pu être mis en évidence. En revanche, les cellules ont commencé à exprimer les antigènes CD45, spécifiques des cellules hématopoiétiques progénitrices.  [...]

La mort de certaines cellules tumorales induite par des dérivés cannabinoïdes

En utilisant des cellules dérivées de gliomes (tumeurs du cerveau) ainsi des lignées de cellules issues de cancers pancréatiques, les chercheurs démontrent que l'expression de la protéine de stress p8 est indispensable à l'activité anti-tumorale des cannabinoïdes.  [...] En effet, les chercheurs observent qu'une fois le THC lié au récepteur CB2, le niveau intracellulaire de céramide (un lipide complexe de la membrane cellulaire ) augmente rapidement. Ceci induit l'activation de l'expression du gène p8. La protéine p8, active à son tour l'expression d'un certain nombre de gènes impliqués dans la réponse au stress du réticulum endoplasmique.  [...]

Question de bio cell >Etat basal ?

Dans la régulation de la synthèse des protéines au niveau transcriptionnel, on me décrit point par point les mécanismes de régulation et avant chaque explications, il y a état basal je ne comprends pas du tout cette expression (je connais juste basal et apical pour les polarités des cellules mais à mon avis ca n'a rien à voir...).  [...] L'état basal de transcription d'un gène est l'état normal. Cela revient à poser la question. est ce que en temps normal (c'est à dire sans activateur ou represseur) ton gène est exprimé ou pas. Pour paraphraser, on peut dire que c'est l'état de base.   [...]

les Virus?

L'ADN peut être emporté dans le noyau (probabilité faible, mais existante) et là, l'ADN est traduit, et en général sont traduits les gènes de prise de possession de la machinerie cellulaire et d'échappement au système immunitaire et à l'apoptose, puis l'ADN est répliqué pour être entourés par les protèines de structure qui sont en général plutôt tardives dans le déroulement dans le temps.  [...] Comme les viroïdes ne fabriquent aucune protéine, il est difficile de voir comment ils affectent la cellule-hôte. L'hypothèse la plus probable est qu'ils perturbent l'expression normale des gènes au niveau des ARN messagers, ce qui affecterait tout le métabolisme cellulaire.  [...]