• Santé - Migration, Glycérol, échantillons

[Biologie Moléculaire] Tampon de charge pour électrophorèse sur gel d'agarose

Le Tris, je présume qu'il a pour rôle de stabiliser l'ADN, le colorant... de colorer le front de migration ^^, mais le glycérol et l'EDTA.  [...] Ce qui est important c'est le dye (bleu de bromophenol generalement) pour suivre la migration et le sucrose/ficoll/glycerol qui permettent a tes echantillons d'aller au fond du puit lorsque que tu deposes.  [...]

[Biochimie] Effet glycérol sur protéine (SOD)

J'ai effectué une migration de superoxide dismutase (SOD) provenant de différentes plantes... J'ai ajouté un tampon de sulubilistation modifié (plus de glycérol que le TS classique) dans deux puits contenant de la SOD de tabac, et je remarque une bande de migration beaucoup plus lourde dans ces deux puits, cela peut-il être lié au fait que le glycérol compact, voir cristallise la SOD.  [...] Les puits concernés sont les numéros 6 et 7 (sur l'image mise en lien avec le sujet) sachant que le puits noir à l'extreme gauche contient du kaleidoscope à 15€ les 10µl et qui ressort en noir, dû au MBT qui colore le gel s'il n'y à pas d'activité au niveau de la SOD.   [...]

[Biochimie] migration sds page

Merci en tout cas pour vos réponse je n'ai pas d'échantillons pour re-tester cette semaine mais c'est prévu pour le début de semaine prochaine, donc je verrais pour l'influence de la concentration en glycérol.  [...] je viens de recommencer un gel en diminuant la concentration en glycérol, en prenant de nouveaux produits (acrylamide, tampons avec le bon pH, b-mercaptoéthanol...). La migration est un peu meilleur mais mes protéines ne dépassent toujours pas la moitié de mon gel de séparation alors que mes marqueurs et mon front de migration sont OK.  [...]

Role du glycérol 50%

J'aimerai avoir quelques informations sur le role du glycérol 50% dans les échantillons biologiques mais aussi son mécanisme d'action.  [...] Le glycerol permet d'abaisser la température de fusion des solution aqueuses. Une solution a 50% reste liquide jusqu'à environ -20C. Cela évite la formation de cristaux de glaces qui peuvent abimer les echantillons bio.  [...]

[Biologie Cellulaire] HEK et nitrogène

b) mettre mes échantillons dans cryotube et congeler pendant qq heures (4-7h) à -20°C puis mettre à -80°C. Ensuite quelque soit le protocole utilisé, lorsque je veux réutiliser mes échantillons, je décongèle rapidement (2 min dans bain Marie), centrifuge 100g, 5 min pour enlever DMSO, récupération du culot et distribution.  [...] Plan pour les prochaines cryocongélations. utiliser soit un DMSO filtré (0.2micro) soit du glycérol (stérilisé, 120°C, 1 bar 15 min). Et faire une congélation lente des échantillons (SVF ou FBS + 10% DMSO ou gly).  [...]

[Biochimie] Extraction d'une protéine nucléaire pour WB

J'ai d'abord commencer à faire une extraction au SDS (plus cocktail d'inihibiteur), j'ai aussi essayé tampon d'extraction classique (Triton, Glycerol, NaCl, EDTA, anti protéases). Apres dosage et dilution dans lameli, j'ai fait un WB (migration sur gel 10% SDS.  [...] Le probleme c'est que ma protéine est pas très exprimé et les anticorps ne sont pas de très bonne qualité (et les tampons d'extraction pas forcement les meilleurs), au final j'ai beaucoup de non spécifique, pas beaucoup de signal au niveau de ma bande.   [...]

[Biologie Moléculaire] mes échantillons avec le laemmli se transforment en gel !

[Biologie Moléculaire] mes échantillons avec le laemmli se transforment en gel.  [...] Pour un western blot je prépare mes échantillons (des surnageants de cellules pour une production de protéine recombinante) dans du laemmli (Tris, SDS, glycérol, bromophenol blue, ß-mercaptoethanol). Jusque là tous va bien, mais après l'étape à 95°C je me retrouve avec une sorte de gel compact dans mon tube.  [...]

[Biologie Moléculaire] les résultats de migration sur gel d'agarose

Autres questions s'il vous plait comment calculer le volume de la BET à ajouter dans le gèle d'agarose à 1%(je veux la relation générale s'il vous plait ), sachant que les informations notées sur le tube de stock sont les suivants. 10 ml (10Mg/ml) (Invitrogen) et quelle la méthode la plus pratique est ce que j'ajoute le BET directement dans le gel ou après la migration et la coloration(après la migration sur gèle),et comment calculer le volume du bleu de bromophénol (le colorant) à ajouter pour suivre la migration de l'échantillon de l'ADN.  [...] Il est un intercalant de l'ADN donc si tu le mets après il ne pourra pas vraiment s'intercaler vu qu'il aura du mal à passer le polymère d'agarose. Pour le bleu de commassie, il sert juste à colorer pour voir ton front de migration, même si il y a aussi un peu de glycérol permettant le dépôt.  [...]

[Génétique] Electrophorèse-ADN

Sinon en plus du bleu de dépôt, il y a du glycérol dans votre solution afin de faire tomber l'ADN au fond de chaque puits et pour qu'il puisse migrer grâce au tampon de migration moins dense.  [...] L'ADN linéaire migre en fonction de la taille du fragment sans autre ajout. Pour être plus précis, la charge du fragment augmente avec la taille. Les fragments les plus gros devraient donc avoir une migration facilitée. cependant, la résolution du gel freine plus les gros fragments que les petits.  [...]

Opéron Lactose / glycérol

Les souches sont conservé dans un milieu contenant du glycérol. Le glycérol n'est pas un inducteur, alors à quoi sert-il dans l'expérience.  [...] Pour le glycérol, je n'ai pas amener mes échantillons à de basses températures. On les a incuber a 28 et 37 degré. Donc son effet cryoprotecteur ne sert pas ici.  [...]