• Santé - Migration, Entrée, Concentration, Protéines

les gels de compression et de sépartion

Pourquoi utilise-t-on un tampon tris avec des pH différents pour les gels de compression et de séparation en western blot.   [...] La différence de pH permet une vitesse de migration différente, une migration plus lente permet l'entrée dans le gel et la concentration des protéines. L'effet est lié au pI de la glycine du tampon de migration.  [...]

[Biologie Moléculaire] PM de ma protéine trop grand

Je suis quasi sûre que c'est bien ma GSK, mais pourrait-il y avoir des phénomènes comme la glycosylation par exemple, qui peuvent rajouter des groupements et alourdir la phospho-GSK3-beta Car ça fait une différence de 8 kDa quand même c'est énorme.   [...] Que ce soit bien la GSK-3ß reste à vérifier, mais sachez qu'en WB on parle de PM apparent. En effet la distance de migration dépend de plusieurs facteurs qui peuvent varier entre les extraits protéiques expérimentaux et le marqueur commercial. quantité de protéines, concentration en sels, etc.  [...]

[Biochimie] TP gel avec protéines

Donc j'ai fait deux gels au final. un gel de séparation à12,5 % et un gel de concentration à 5%. Dans les 9 puits j'ai mis différentes protéines. Trypsinogène de pancréas, anhydrase carbonique, albumine d'oeuf etc, pour comparer la migration de toutes ces protéines, puis j'ai récupéré mes deux gels.  [...] Tu fais un seul organigramme qui réuni ces 3 éléments où ces 3 éléments aboutissent à la fin à la meme chose =. Détermination de la masse moléculaire d'un mélange de protéines bactériens.  [...]

Sds-page

Oui tout à fait. Le SDS est un dénaturant protéique selon la concentration. Il joue un double rôle dans la migration en SDS-page. dénaturer et charger les protéines.  [...] En cas de westernblot on utilise souvent une concentration plus faible en SDS afin de l'éliminer rapidement au lavage et redonner une configuration native (ou presque) aux protéines.  [...]

[Biologie Moléculaire] Western blot sur des echantillons de foie murins

Ton protocol m'abeaucoup aidé. J'ai extrait mes proteines et fais mon dosage de Bradford. Par contre, jai un soucis, mes proteines sont très concentrées. Du coup, pour avoir les 20µg qu'il faut pour le gel, j'ai des valeurs negatives. Que faire dans ces conditions Estce que je peux diluer mes ech Et si oui, comment pourrais-je les quantifier a la fin.  [...] Encore une. Que se passe t-il lorsqu'on load des concentrations élevées de protéines Est-ce que. la migration, le transfert et la révelation se font quand même Ou bien la concentration de protéine est-elle très importante dans les puits.  [...]

[Biologie Moléculaire] Western Blot Transfert sur membrane

Oui c'est ça je mets 3 membranes les unes sur les autres...et là j'ai des bandes bleues sur les 3 (les bandes de fin de migration) mais qd je les mets dans le rouge pinceau je vois aucune bande donc pas de transfert de protéine Ou un over transfert.  [...] Est il possible que je vois les bandes bleues (car bandes de fin de migration grosse concentration de bleu de commassie...je sais pas...) mais que les protéines n'ont pas transférées.  [...]

[Biochimie] migration sds page

je viens de recommencer un gel en diminuant la concentration en glycérol, en prenant de nouveaux produits (acrylamide, tampons avec le bon pH, b-mercaptoéthanol...). La migration est un peu meilleur mais mes protéines ne dépassent toujours pas la moitié de mon gel de séparation alors que mes marqueurs et mon front de migration sont OK.  [...] je ne connais pas le kit d'extraction que tu utilises mais est ce que ça ne serais pas plutôt lui qui est pourri. Je veux dire, pour une raison ou une autre (trop vieux, pas bonnes conditions de stockage...) est ce que le pH des tampons de ton kit n'aurait pas varié, ou il n'y aurait-il pas eu précipitation ou concentration (du a une évaporation) en sel (je parle toujours des tampons).  [...]

Matériels et méthodes | Dossier

L'élution de la protéine kinase C est obtenue par addition de chlorure de sodium pour arriver à la concentration de 150 mM. L'élution est pratiquée de manière isocratique (Nakanishi H. et Exton J., 1992).  [...] Les granulocytes neutrophiles sont dans du tampon Hanks'HEPES à la concentration de 5.10 6 cellules/ml et à raison de 25.10 6 cellules par tube. Deux incubations de 15 minutes chacune sont réalisées avec du PMSF à 57 µM, ceci pour limiter la dégradation de la protéine kinase C.  [...]

[Biologie Cellulaire] Metastase, MMP, intégrines

Les MMP ont une spécificité de dégradation. Elles dégradent certains collagènes, comme le collagène de type IV, qui eux-mêmes peuvent ainsi générer des fragments favorisant l'angiogenèse. Elles dégradent donc les protéines de la matrice extracellulaire qui vont entraver leur migration et pas forcément les aider à migrer via les intégrines.  [...] Je finirais par une petite précision, à creuser chez les MMPs. Certaines sont ancrées à la membrane plasmique. Lorsque la cellule migre, elle est polarisée. Peut-être la cellule se sert de cette polarisation pour placer les MMP membranaire vers l'avant de la cellule, relativement au sens de migration, pour favoriser une dégradation ciblée de la matrice extracellulaire. Ce n'est qu'une hypothèse.  [...]

[Biotechnologie] Pb profiles electrophoretiques de proteines decales

Apres migration des proteines, j'obtiens des profils electrophoretiques de l'echantillon en cours d'analyse. le pb que je rencontre.  [...] la tension a la meme valeur entre les 2 labos.. Ce sont des petites electrodes qui viennent tremper dans chaque puit et qui apportent une certaine tension pour la migration des proteines dans les canaux de la plaque.  [...]