• Santé - Migration, Bandes, échantillons

Problème de migration SDS-PAGE

Je fais migrer mes fractions sur un gel SDS-PAGE 15%, la migration ne migre pas droite par rappport à mon marqueur de taille, j'ai des trop grosse bande (non du à la quantité de protéine déposée) qui déborde c'est assez bizzarre auriez-vous une solution à mon soucis.  [...] Si les ratios étaient de 50% chacun, cela signifierait que votre Laemmli est à 2X. Si vous voulez préparer une solution de volume final de 10µL par exemple, il faudra ajouter 10/5=2µL de bleu de laemmli, et complétez jusque 10µL avec vos échantillons dilués à la bonne concentration.  [...]

probleme DGGE

Je suis actuellement en stage dans un laboratoire d'analyse du sol. J'ai pour but de faire migrer plusieurs échantillons de terre selon des conditions différentes à travers un gel DGGE.  [...] Cependant lors de la migration seul le lader migre (seulement deux bandes...) mais les échantillons se diffusent dans les puits et ne migrent pas.  [...]

[Biologie Moléculaire] Migration SDS page en "sourire"

Je rencontre récemment un problème avec mes migrations SDS page. la migration ne se fait pas de manière droite, mais remonte de chacun des deux cotés, formant un front de migration en sourire, très génant s'il y a des échantillons placés aux extrémités.  [...] Cela cause une migration plus lente des échantillons des puits périphériques caractérisé par des bandes protéiques ayant migré plus rapidement au centre du gel, créant un patron ayant la forme d'un sourire... Pour assurer un refroidissement uniforme de tout le gel, diminuer le voltage et augmenter la durée de migration.  [...]

[Biochimie] électrophorèse

y'a t'il un petit logiciel pour simuler la migration des bandes d'échantillons ( simulation d'une électrophorèse) on lui fournit quelques données et on simule le résultat.  [...] Je te rejoins. En fait c'est bien pratique (mais je m'en passe) pour estimer la taille d'un fragment plus précisément quand attend une bande entre 2 bandes du marqueur et que l'on veut être sûr d'avoir la bonne taille. Mais bon.  [...]

[Biochimie] Extraction ARN

Je suis actuellement en train d'extraire des ARN viraux par méthode double extraction trizol-trizol LS et lorsque j'ai effectué la migration sur gel, je n'observe que très rarement les deux bandes caractéristiques à 18s et 28s. Normalement, je devrais observer deux belles bandes pour chaque échantillons puisqu'après quantification, j'ai pu voir que mes ARN étaient en concentration satisfaisante ( entre 0.5 et 1.8 µg/µL).  [...] Hier j'ai essayé de refaire migrer des échantillons en faisant resolubiliser un peu les culots ( 10min à 65°C). Le profil que j'obtient est différent de celui que j'obtenais au départ. je vois pratiquement que des doubles bandes après une resolubilisation ce qui est positif puisqu'au départ je ne voyais presque pas de doubles blandes.  [...]

RT PCR one step de quiagen

voila dans mon labo on fait de la RT PCR plus precisement une IC RT PCR sur du vegetal pour detecter un virus et on rencontre bcp de pb technique malgre de nombreuses precautions. du genre qu'on obtient des bandes positives pour ts nos echantillon y compris nos temoins sains et en plus de ces bandes on a le front de migration qui resort tres fortement en bas du gel (meme plus fort que les bandes positives).  [...] g fais une manip ou g change de kit et d'amorce, bref du materiel neuf et stérilisé et j'ai obtenu les memes résultats des bandes positives partout. puis une autre manip dans un autre labo mais avec notre materiel (j'ai fais autoclaver les pipettes cette fois ci) et ca a marché meme si quand meme on avait des bandes vraiment tres faible(a peine visible sur la photo) pour certains echantillons et pas pour les TS.  [...]

[Biochimie] Electrophorèse SDS Page des IgG

Ce que je ne comprend c'est que pour les IgG non traitées j'obtiens 2 bandes de migration et pour les IgG traitées j'obtiens 6 bandes de migration.  [...] Ce que je ne comprend pas c'est que pour l'essai avec uniquement les IgG sans mercaptoéthanol il y ait deux bandes de migration car les 4 chaines de l'IgG sont maintenues entre elles par des ponts disulfures qui ne devraient donc pas être rompus quand ils sont soumis que à la dénaturation par le SDS donc on devrait obtenir qu'une bande de migration correspond à la masse molaire de l'IgG totale.  [...]

[Biologie Moléculaire] Révélation des extraits d'ADN

3-parallèlement, j'ai préparer les échantillons à spoter en prélevant 7µl d'extraits d'ADN dissouts dans du TE, auxquels je rajoute 3µl de tampon de charge (Bleu de bromophénol).  [...] les fameuses bandes bleues sont apparues après migration, et aucune fluorescence n'est apparue au transilluminateur. j'espère avoir répondue à votre questionnement.  [...]

[Biologie Moléculaire] Page sds

plus le voltage est élevé, la séparation des bandes est rapide mais lors de la révélation la séparation des bandes sera moins nette. Pour certains protocoles nous réalisons des migration à faible voltage durant plusieurs heures.  [...] Si ce n'est toujours pas bon, tu peux lancer la migration pendant 16h (sur la nuit) à 60V. Le lendemain, tu check l'avance des bandes du marqueur, et tu peux accelérer à 100V pour plusieurs heures si ce n'est toujours pas bon.  [...]

[Biologie Moléculaire] Electrophorèse (ADN sur Agarose) et Bromure d'éthidium

Si vous avez perdu du signal en laissant trop migrer votre ADN et que vous n'avez pas mis de BEt dans le tampon de migration, vous pouvez également récupérer ce gel et le mettre dans un bain de tampon de migration + BEt + agitation. Il faut incuber pendant un bon moment quand même, donc s'il vous reste de l'échantillon ça peut être plus rapide de refaire un gel et d'en redéposer (en laissant moins migrer cette fois ou en mettant du BEt dans le tampon cette fois ).  [...] Des fois, pour faire migrer beaucoup d'échantillons en même temps, tu mets 2 peignes dans ton gel pour avoir plus de puits (un à l'emplacement habituel et l'autre vers le milieu du gel). Et il arrive que tes échantillons du bas soient mal colorés à cause du BEt qui a migré vers le haut.  [...]