• Santé - Migration, ADN, ARN

[Biologie Moléculaire] pb dosage ARNtotal spectro

Oui je retrouve de l'ARN...mais je vois peu la bande qui correspond à l'ARN 28S. Je vois bien la bande qui correspond au 18S + smear = ARNm. (il faut dire aussi que je n'ai pas de marqueur de migration d'ARN, du coup je mets comme marqueur du marqueur 1kb ADN double brin alors les tailles les distances de migration de correspondent pas entre mes ARN et le marqueur).  [...] La dilution que tu utilises est trop forte. Pour ta migration avec l'ARN, laisse tomber le marqueur de taille car les tailles sont differentes entre ADN et ARN. Perso, dans ce cas la, je n'en mets pas de marqueurs de taille.  [...]

[Biologie Cellulaire] Arn

- Les nucléotides constituant l'ARN (et l'ADN) portent un groupement phosphate qui est chargé positivement et qui permet, pendant une électrophorèse, la migration vers le pôle chargé positivement de la cuve (donc la cathode..).  [...] - la distance de migration de l'ADN ou l'ARN dépend de leur taille (plus il est gros, moins il migrera loin) et de la résolution des gels (la taille des trous à travers lesquels doivent passer les molécules).  [...]

[Biologie Moléculaire] Gel de retard

Eske je peut trouvé quelqu'un qui peut m'expliquer la nature des interaction qui s'établissent entre ADN/protéines ARN/protéines lors de la migration sur un gel de retard.. merci d'avance.  [...] Le principe d'un EMSA, c'est qu'un fragment d'ADN lié à un facteur est plus lourd donc migrera moins vite qu'un fragment d'ADN seul, ce qui permet donc (avec les contrôles adéquats) de démontrer que telle protéine se fixe sur telle séquence, ou que telle séquence est un domaine de fixation d'un facteur,  [...]

pourquoi on dit que l'ARN est dense?

La mesure de densité de ce genre de macromolécules (ADN, ARN) s'effectue par centrifugation sur Chlorure de Césium (CsCl). Lorsqu'on centrifuge une solution de CsCl dans un tube, elle produit un gradient de densité (haut du tube. faible densité et bas du tube.  [...] Les composés qui migrent facilement se lient d'autant plus facilement au Césium (Cs+) par liaison de charge. L'ADN et l'ARN, quand ils sont monocaténaires, créent plus de charges et donc plus de liens avec le Cs+ que le bicaténaire d'où leur migration plus importante (et donc leur densité plus importante).  [...]

Expériences en génétique…

Une fois que tu l'as et que tu l'as coupé tu vas le faire migrer sur un gel d'agarose (+ du bromur d'ethidium) parcouru par un courant electrique. La migration de l'ADN dans le gel va se faire en fonction de la taille. Comme tu as coupé ton gene tu as deux bouts, un grand qui migre lentement et un petit (ton gène en principe) qui migre plus vite.  [...] Et la je ne suis pas vraiment d'accord. en general pour trouver un gene specifique, on utilise plutot une sonde radioactive (adn (ou arn) complementaire du gene à identifier, marqué radioactivement, par exemple, au phosphore 32). Pour cette methode, il faut denaturer l'adn apres la migration, en general, par la soude.  [...]

[Biologie Moléculaire] Problème de gel d'agarose

tu dis que tu purif sur colonne avant de déposer. Tu le fais systématiquement Car ca ressemble à une migration d'ADN dans un tampon un peu spécial qui modifie la migration. Quand je dis tampon spécial c'est le conditionnement de ton ADN par rapport à de l'eau.  [...] Quand tu modifies ton adn avec des enzymes les tampons d'activité contiennent souvent des produits qui pourrissent la migration, c'est surement ça.  [...]

recherche d'un contact par mail avec un laborantin

En fait il n'y a pas moyen de différencier votre ADN du mien juste par électrophorèse. L'électrophorèse ne permet que de séparer des fragments d'ADN selon leur longueur (qui est proportionnelle à leur charge d'où les différences de migration sous l'action d'un champ électrique).  [...] Quand au gel, un simple gel d'agarose fait l'affaire, le tampon de migration phosphate est bon aussi. je crois qu'il est également possible de marquer l'ADN à l'aide de nitrate d'argent (vieux matériel photographique). Bref, à part l'étape de PCR, tout est théoriquement faisable dans la cuisine (ultra-propre pour éviter les contaminations ).  [...]

[Biologie Moléculaire] Problème de migration électrophorèse (produits bloqués dans les puits)

J'ai vérifié tous mes produits et ils sont tous corrects. Dans le doute j'ai fait une autre migration avec les produits issus d'une nouvelle PCR et je n'ai eu ce problème que sur un seul échantillon.  [...] Ici tu as des smear ce qui explique la diversité des tailles des fragments d'ADN obtenus aprés PCR, je doute aussi qu'il y'est de l'ARN dans ton echantillon... si c'est le cas tu devrais peut être faire un traitement avec la RNase et refaire la migration.  [...]

[Biologie Moléculaire] électrophorèse en champ pulsé

un gel ou le ladder apparait, une fluorescence qui apparait au niveau des puits pu j'ai débosé mes plugs par contre je ne vois pas de migration de mon ADN.  [...] je ne sais pas est ce que c'est probléme d'enzyme condition d'incubation ou pas bien mélanger ou il n y a pas d'ADN déjà (plugs mal préparé) vraiment j'ai peur que ca soit question d'ADN a votre avis la fluorescance qui est dans les puits ca correspond a quoi et pkoi a votre avis il n y a pas de migration.  [...]

[Biologie Moléculaire] Electrophorèse (ADN sur Agarose) et Bromure d'éthidium

Si vous avez perdu du signal en laissant trop migrer votre ADN et que vous n'avez pas mis de BEt dans le tampon de migration, vous pouvez également récupérer ce gel et le mettre dans un bain de tampon de migration + BEt + agitation. Il faut incuber pendant un bon moment quand même, donc s'il vous reste de l'échantillon ça peut être plus rapide de refaire un gel et d'en redéposer (en laissant moins migrer cette fois ou en mettant du BEt dans le tampon cette fois ).  [...] en ce qui concerne l interference du BET dan la migration, comme on voulait separer de l'ADN issu de digestion plasmidique, la conformation de l ADN est aussi importante (circulaire, linéaire, superenroulée) et je pense que le fait que le BET soit présent avant la migration et s'intercalle doit modifier un peu cette conformation.  [...]