• Santé - Méthode, Enzymes, Restriction

[Biologie Moléculaire] ligation

Par exemple, lorsque tu fais ta digestion, il est conseillé de faire des témoins négatifs (sans enzymes de restrictions), des témoins positifs (lors d'une double digestion, tu vas faire deux témoins de simple digestion), puis tu vas faire migrer le tout (ton produit de digestion, tes trois témoins) sur des gels d'agarose.  [...] - Soit on clive le vecteur avec deux enzymes de restriction différentes qui génèrent des bouts collants incompatibles. L'insert est clivé avec les même enzymes. Cette méthode a l'avantage d'empêcher la recircularisation du vecteur et favoriser une insertion orientée de l'insert dans le vecteur.  [...]

[Biologie Moléculaire] Polymorphisme et RFLP

Par exemple, les RFLP sont des polymorphisme de longueur des fragments de restriction... c'est donc juste la variabilité de longueur de fragment d'ADN après digestion enzymatique Rien de plus complexe.  [...] La méthode des enzymes de restriction (plus tellement employée je pense) n'est qu'un révélateur de mutations dans le gène étudié.  [...]

[Biologie Moléculaire] Comment extraire un gène??

Durant ma révision de Bio-Mol, je me suis posée une question sur la méthode de clonage des gène et le choix des enzymes de réstriction.  [...] On a un gène d'intérêt de séquence inconnue, on veut le transférer dans une cellule bactérienne ou végétale. Comment faire pour l'extraire et quelle enzyme de restriction choisir si on doit le cloner dans un vecteur type pGEM-T vector.  [...]

[Génétique] Rflp

3) Un profil de restriction est ce qu'on obtient apres avoir digéré de l'ADN par des enzymes de restriction et l'avoir fait migrer sur gel. On obtient des bandes qui correspondent a des fragments de restriction. pour détecter les différences alléliques par cette méthode, il faut bien sur que la différence cause une modification, une apparition ou une disparition d'un site de restriction.  [...] 4)même principe pour la filiation. Il existe des polymorphismes génétiques (rien de pathologique) qui entrainent des modifications de profils de restriction dans certaines régions. On peut alors l'utiliser pour des tests de filiation.  [...]

[Biotechnologie] An efficient TALEN mutagenesis system in rice

L'ADN chromosomique (hors plasmides, etc.) provenants des individus/plants résistants à l'hygromycine est extrait avec une méthode/kit rapide spécifique pour plantes (ex. Tiangen TM concernant l'équipe qui publie). La même méthode de digestion par PCR / enzymes de restriction que pour les chloroplastes est appliquée pour scanner les lignées transgéniques (Fig.  [...] Je suppose que les séquences ciblées par les enzymes de restrictions participent du transgènes, auquel cas on digère la séquence ADN et on regarde ce que ça donne par PCR pour détecter les inserts.  [...]

Enzymes de restriction

Les enzymes de restriction n'ont aucune activité sur l'ARN (d'autant que celui-ci est simple brin). Maintenant il existe d'autre enzymes pouvant clouper l'ARN spécifiquement apres certains residus, ou spécifiquement quand l'ARN est sous forme double brin.  [...] j'ai bien suivis votre discussion et comme vous avez l'air d'en savoir plus que moi est ce que quelqu'un pourrait m'expliquer quelle est la différence entre des enzymes de restriction sensible à la méthylation et les enzyme de restriction qui ne le sont pas en d'autre termes pourquoi certaines enzymes ne sont pas sensibles à la méthylation.  [...]

[Biochimie] Petite interrogation sur les enzymes de restrictions

Excuse moi si je n'est pas utilisé le bon terme, j'ai écris ce message un peu rapidement, c'est vrai que c'est LA PCR et, vous avez raison, il n'y a pas d'enzyme de restriction mais ce sont les enzymes polymérase dont je parlais (ou TAQ polymérase). Voilà après cette correction pouvez vous répondre à ma question précedemment posé.  [...] Vous etes sur qu'il ne s'agit pas d'enzymes de restriction Ca collerait plus a l'interrogation initiale de Valentino6 puisque en effet, la police peut étudier l'ADN en analysant les polymorphisme de restriction (RFLP) qui justement peut faire invervenir un grand nombre d'enzymes différentes.  [...]

[Biochimie] Enzymes de restriction pour détecter les mutations

Il faut prendre en compte toute la séquence reconnue par les enzymes de restriction. à part l'enzyme 4, les autres possèdent des séquences que l'on ne retrouve pas dans le gène, ni normal ni muté.  [...] enz5. GAGCTC, il y a bien un site de restriction de l'enzyme 5 dans les 2 séquences, mais pas au niveau de la mutation, donc elle ne sert à rien ici.  [...]

enzymes de restriction

quelles sont les differentes utilisations pratiques en medecine ou en science par exemple des enzymes de restriction et quelles sont les methodes qui se fondent sur ces derniers.  [...] heu encore une autre question.quel est l'intérêt que présente l'utilisation des enzymes de restriction dans le bricolage des vecteurs qui sont utilisés pour la transgenèse.  [...]

[Génétique] les adaptateurs enzymatiques

bonjour à tous, je suis entrain de caractériser un gène dans une approche gène candidat et je souhaite utiliser des enzymes de restriction et des adaptateurs spécifiques à ces enzymes. c'est une nouvelle méthodo que je souhaite découvrir. j'ai chercher dans la littérature des protocoles concernant ce sujet mais je ne trouve rien.  [...] je voulais donc savoir si quelqu'un avait déjà travaillé sur ce type de manip et si il peut me donner quelques éclaircissements et conseils. Merci.   [...]