• Santé - Méthanol, Protéines, Charge

[Biochimie] migration sds page

Je te conseille de transférer sur des membranes de PVDF préalablement mouillée dans du méthanol. La capacité de charge en protèïnes est plus importante (le double de la nitrocellulose).  [...] Ainsi tu peux visualiser tes protéïnes sur la membrane juste en la retrempant dans le méthanol puis en transilluminant. Tu verras peut-être tes bas poids molec apparaître.  [...]

[Biologie Moléculaire] Tampon SDS-PAGE

Bonjour, j'aimerais savoir l'utilité du SDS dans le tampon. le sodium dodecyl sulfate (SDS) est un détergeant fort qui enveloppe les chaînes polypeptidiques des protéines de charges négatives. Ces charges se repoussent et déplient les chaînes polypeptidiques.  [...] J'ai une autre question à propes des tampon pour les WB. Si je prépare mon tampon avec du méthanol, au lieu du SDS. Le méthanol à t'il même utilité que le SDS Permet-il aux protéines d'avoir une charge proportionnelle à leur masse.  [...]

[Biologie Moléculaire] Gène0 AOX1!!

L'expression du gène AOX1 ne se fait qu'en présence de méthanol et seulement celui ci, ainsi le gène AOX1 a été isolé, son promoteur a été introduit dans des vecteurs pour diriger l'expression du gène codant pour la protéine désirée.  [...] Pourquoi Car le méthanol porte une influence sur la transcription de l'ARNm indispensable à la traduction des proteines du gène AOX1.  [...]

[Génétique] Adn

Le méthanol permet de dissocier le SDS des protéines afin que celles-ci puisse se fixer sur la membrane grâce à des interactions hydrophobes non permises par le SDS collé aux protéines.  [...] L'extraction des protéines (ou des acides nucléiques, ça repose sur le même principe) nécessite le phénol puis le chloforme mélangé avec un peu d'alcool isoamylique. Cela permet de séparer les protéines des acides nucléiques, ceux ci n'étant pas soluble dans le phénol ou chloroforme.  [...]

extraction et séparations des composants d'une membrane

Finalement la réponse à été simple...je l'ai posée à un bioanaliste (plus simple qu'un cristallographe). tu met du methanol, les protéïnes précipitent, tu centrifuges ( ultracentrifugeuse) et voilà.  [...] Une idée juste comme ça. tu pourrais faire agir des phospholipases avant le méthanol + centri. ça te permet de décrocher les protéines périphériques. Tu auras ainsi 2 étapes de purif et (j'imagines) un échantillon de lipides plus pur.  [...]

[Biochimie] Extraction acide gras membranaires de bactéries en méthyl ester

voila je suis légèrement ennuye avec mon probleme ca fait quelque temps que je cherche des reponse mais elle ne me convienne pas pourriez vous m'aider.   [...] g un culot cellulaire auquel j'ajoute de l'ether sec que l'on evapore par un flux azote. Ensuitej'ajoute du toluène sec et du méthanol. Je sais que le méthanol permet de précipiter les proteines mais je ne sais pas du tout à koi sert l'ether et le toluène.  [...]

[Biochimie] Western blot en pointillés

Certaines protéines sont capricieuses lors du transfert. Tu utilises du PVDF, tu transfères en méthanol sans SDS Tu fais 30V combien de temps.  [...] Avant je faisais un transfert identique à toi au niveau chimique (PVDF, méthanol sans SDS), 1 heure 30 à 400mA constant. J'avais les protéines de haut poids moléculaire qui se transférait mal vu avec les marqueurs de taille + PARP non clivé (110 kDa). Du coup je suis passé au même transfert mais d'une durée de 2h15-2h30.  [...]

[Biologie Moléculaire] Séparation des protéines: HPLC!!

une derniere chause c'est que dans un exercice on a separé les proteines en se basant sur la technique (X)alors en fait je crois qu'elle a le meme principe que HPLC.  [...] en phase inverse, les composés polaires sont élués en premier (pour des protéines, les plus petites sortent d'abord). Ensuite, avec l'augmentation de solvent polaire dans le phase mobile (methanol, acetonitrile) les molécules hydrophobes (ou les grosses protéines) seront éluées.  [...]

[Biochimie] Questions Coomassie et Western Blot

Une question quant au rôle du méthanol dans les solutions de staining/destaining pour les Coomassie Il limite la diffusion des protéines.  [...] Je ne connais pas le rôle exact, mais nous on remplace tout ça par de l'éthanol, c'est beaucoup moins toxique et ça marche tout aussi bien.   [...]

fixation des cellules

La fixation PAF te créé des liaisons covalentes entre les NH2 de tes protéines. Le méthanol (perso je l'utilise froid, sortit du congélo -20°C) dénature et précipite tes protéines.  [...] La méthode de fixation par la formaldéhyde va créer des ponts entre les protéines ce qui permet une conservation de la localisation. De plus les lipides ne sont pas solubilisés. C'est pour cette raison qu'il faut perméabiliser tes membranes avant de faire une manip d'immuno par exempl.  [...]