• Santé - Mesure, Activité, Protéine

purification des protéines

je voudrais savoir comment mesure t'on l'activité spécifique d'une protéine après avoir purifier cette dernière (méthode ou peut être y'a des appareillages ou encore on peut réaliser cette mesure simplement dans labo avec des méthodes peu coûteuses).  [...] ben evidemment ca depends de la protéine purifiée, mais de maniere generale l'activité spécifique est la quantité de produit formé rapporté a la quantité de protéine.  [...]

[Divers] "Pathologies" - Aide pour exercice

On dose l'activité de cette protéine chez différents patients, qui présentent des tableaux cliniques de sévérité variable (tableau ci-contre).  [...] 1) Expliquez dans quelle mesure ces données montrent que des différences dans l'activité d'une seule protéine peuvent avoir des conséquences phénotypiques très complexes.  [...]

[Biochimie] Influence de la concentration en enzyme Calcul activité spécifique

j'ai réalisé un TP sur l'étude de l'influence de plusieurs facteurs sur la béta-galactosidase, et j'ai du mal à trouver mon activité spécifique.  [...] Si au cours d'une étape de purification l'enzyme a été partiellement dénaturée (à cause de conditions défavorables ou d'une erreur), la mesure de l'activité spécifique ne pourra donner qu'une information approximative voire fausse de la pureté de la protéine.  [...]

Purification d'une enzyme

Lors de la purification d'une enzyme, comment par mesure d'activité peut on s'assurer d'avoir obtenu la préparation la plus pure possible et comment vérifier que l'on a obtenu l'enzyme à l'état pur.  [...] Il faut que l'activité spécifique de l'enzyme pure (AS en u/mg) soit connue. On mesure l'activité de la préparation en unité par mL (u/mL) et on dose la concentration en protéine en mg/mL. Ensuite on fait le rapport activité/mL et mg/mL ce qui donne l'AS de la préparation.  [...]

Les résultats déjà obtenus | Dossier

5% d'activité ont été mesuré après traitement à la gentamicine dans les cellules possédant seulement la mutation Arg208 (17). Les auteurs expliquent que ces différences peuvent provenir de différents paramètres, tels que la stabilité de l' ARNm (les ARNm contenant un codon stop précoce sont instables), la durée de vie de la protéine etc.  [...] Il est important de noter qu'il existe une différence essentielle, qui pourrait permettre d'expliquer ces différences de résultats. La protéine CFTR possède une activité enzymatique, alors que la dystrophine est une protéine de structure des muscles. Il est facilement envisageable que très peu d'une protéine ayant une activité enzymatique permette d'attenuer les effets d'une maladie, alors qu'il faudra une quantité plus importante d'une protéine de structure.  [...]

Matériels et méthodes | Dossier

Les tubes sont centrifugés 5 minutes à 700 g, les surnageants sont placés dans les cuves spectrophotométriques. L'activité est mesurée à l'aide de NADH 0,2 mM et de pyruvate 1,6 mM. la cinétique est réalisée à 30°C et lue à 340 nm. L'activité maximale de la LDH libérée dans le surnageant est dosée après lyse des cellules par ajout d' eau distillée (Levert H. et al., 1998).  [...] Pour être utilisée dans l'étude de liaison ou dans la mesure d'activité, il est nécessaire de quantifier la protéine kinase C, ceci est fait par un dosage de Lowry. Pour cela, une gamme étalon est réalisée en utilisant une solution de sérum albumine comme source de protéines, chaque tube de cette gamme et chaque tube échantillon à doser faisant 0,5 ml.  [...]

Vers un nouvel antibiotique à base de miel ?

Les chercheurs ont ensuite mis au point un système pour éliminer au fur et à mesure différents composants du miel afin de déterminer plus précisément le ou les facteurs responsables de l'activité antimicrobienne. Ainsi, la neutralisation du peroxyde d' hydrogène et du méthylglyoxal ne diminue que très peu les propriétés antibactériennes du miel, alors que l'élimination de la protéine nommée défensine réduit l'action presque totalement.  [...] Les défensines sont des protéines retrouvées à la fois chez les invertébrés, comme les insectes, et chez les vertébrés. Chez l'homme, elles sont impliquées dans la défense immunitaire et sont essentielles. Leur mauvais fonctionnement conduit à des maladies chroniques, comme la maladie de Crohn par exemple.  [...]

Résultats | Dossier

Dans les cas où les cellules sont incubées 4 heures avec soit l'acide arachidonique, soit le LPS, soit les deux en même temps, l'enzyme est présente dans les mêmes quantités, rendant possible une éventuelle mesure de l'activité enzymatique de cette protéine.  [...] Les conditions d'incubation des lymphocytes et des monocytes retenues pour mesurer l'activité enzymatique de COX-1 sont 1 heure en présence d'acide arachidonique à 50µM et de calcium ionophore à 50µM, de cette façon la synthèse de COX-2 n'est pas induite. Pour cette dernière il se pose un autre problème, si les cellules sont incubées pendant 3 à 4 heures, la COX-1 est présente de façon active, ce qui interférerait avec une mesure de l'activité enzymatique de la COX-2.  [...]

[Biochimie] facteur de purification et rendement

Lors de la détermination de l'activité de la pyruvate kinase, on a utilisé 100 microlitres de solution à 0,1 mg/mL, prélevés sur les 200 mL de solution obtenue après une étape de purification par chromatographie d'achange d'ions portant sur 1 litre de solution de départ dont l'activité spécifique était de 10 U/mg de protéines et la concentration en protéines de 2 mg/mL.  [...] En fait Berzelius à raison de ce poser des questions car sans une mesure autre que la quantité de protéines dans la fraction après purification il sera difficile de calculer le rendement ou l`enrichissement. En fait il manquerait soit une mesure de l`activité totale, spécifique ou enzymatique.  [...]

[Divers] aide révision questions diverses

Pour qu'une protéine soit produite sans arrêt, il faut généralement une mutation sur le promoteur (ou sur le promoteur du facteur de transcription qui active sa transcription, etc...). Une mutation dans la séquence codante peut par contre en effet perturber les signaux d'adressage.  [...] On dit que l'activité spécifique d'une enzyme c'est le rapport de l'activité spécifique sur le nombre de protéines. Mais les protéines dont-il est question c'est toutes les protéines du mélange.  [...]