• Santé - Membrane, Supérieure, Tube, Hybridation

Southern bruit de fond

Depuis quelque temps, j'ai du bruit de fond sur une partie de la membrane.En effet, la sonde se fixe de façon non spécifique sur la partie non recouverte (en contact direct avec la solution d'hybridation + sonde) de la membrane.En général, la taille de la membrane étant supérieure à la circonférence de mon tube à hybridation, la partie de la membrane recouverte (chevauchement) est propre.  [...] S'agit-il d'un produit défectueux d'une dérive de la température du four.   [...]

[Biochimie] Avatar - Le film

... Passons. Où en sont les fieffés du tube à essai dans les expériences d'hybridation génétiques et les chimères Jusqu'à quel point un hybride pluricellulaire est viable quand on mélange deux espèces pas forcément cousines germaines.  [...] - nos poumons dériveraient d'une super-vascularisation puis invagination de la muqueuse buccale (pour les vertébrés, c'est probablement arrivé sous la langue), pas qu'il s'agissait d'un système né de notre tube digestif à proprement parler - mais cela reste une hypothèse.  [...]

[Biologie Moléculaire] Amplification infructueuse

Non je n'ai pas fait migré mon ADN, effectivement ca peut être pas mal, si je met l'ADN pure non fragmenté je dois m'attendre a quelle taille que je sache si je dois prendre un autre marqueur de taille plus grand, et combien de temps pour électrophorèse, car je doute que les chromosomes soient toujours intact mais la taille sera quand même largement supérieur a ce que j'attends en ce moment ^^.  [...] Non c'est plus parce que la Taq est active à température ambiante voir même sur la glace. Donc en mettant ton tube directement à 94°, tu évite une hybridation non spécifique des primers et une éventuelle élongation, ce qui diminuera le rendement global de la PCR.  [...]

[Biochimie] Questions Western Blot

Hmm, il me semble que le méthanol permet de rendre la membrane PVDF (plutôt hydrophobe) hydrophile et de faciliter ainsi les transferts. Les membranes de nitrocellulose ne nécessitent pas ce traitement au méthanol pour que les transferts s'effectuent.  [...] -de retenter le coup avec ta membrane uniquement si tes anticorps sont de bonne qualité / ta protéine se révèle facilement. Si c'est pour une hybridation plus délicate, tu risques d'avoir un résultat de mauvaise qualité.  [...]

[Biochimie] Dot Blot et Northern Blot

Le nothern blot, on fait migrer des ARN dans un gel afin de les séparer. On les transfère sur une membrane et on révèle la ou les bandes qui nous intéressent grâce à l'hybridation de sonde ribonucléiques marquées.  [...] A part la membrane, il n'y a finalement aucune similitude. La question que je ne m'étais jamais posé c'est est ce que l'on a fait des dot blot avec autre chose que des protéines (Je n'ai jamais pratiqué ou vu que cette application).  [...]

[Biochimie] Western Blot? Principe de la méthode?

Bah justement, tu as donné la réponse dans ta question, il y a une étape de transfert sur membrane suivie d'une étape d' hybridation qui permet de mettre en avant de manière spécifique une protéine, un ADN ou un ARN.  [...] A contrario, l'éléctrophorèse, a ma connaissance, marque tout ce qui se trouve dans le gel, comme quand on fait une éléctrophorèse et qu'on révèle l'ADN sous UV.   [...]

[Biologie Moléculaire] analyse southern et northern blot

Voila, j'ai un peu de mal à interpréter les résultats de l'étude d'un gène par hybridation sur membrane. j'étudie une anomalie de production d'un facteur de croissance chez les chats siamois. On a donc réalisé successivment un Southern, un Northern et un Western ( avec la protéine).  [...] Chez les individus atteints, je retrouve deux signaux en southern ( au lieu d'un chez les individus sains). les signaux étant les mêmes ( sain/ malade) en northern on a donc supposé que la mutation avait lieu sur une séquence nucléotidique qui était supprimé par excision.   [...]

[Biologie Moléculaire] Promoteur banque BAC

Ainsi tu as des bactéries sur la membrane de nitrocellulose. Ensuite, tu réalise une hybridation de sondes chaudes spécifiques de ton promoteur, tu révèles en autoradiographie et tu vois quelles colonies sont marquées. Pour être sûr que ton promoteur est entier, tu peux éventuellement faire deux répliques.  [...] Sur chacune tu mets une sonde différente. pour une réplique une sonde hybridant juste en amont de la partie qui t'intéresse, pour l'autre réplique une sonde hybridant juste en aval de ton promoteur. Les colonies marquées par les deux sondes contiennent le promoteur entier.  [...]

[Biotechnologie] Ogm

Vous pourriez sans doute être plus précis sur vos demandes... On ne voit pas vraiment le lien avec les OGM et je ne vois pas pourquoi ce serait à nous de deviner ce que vous cherchez réellement.   [...] Vous mettez tout cela ensemble dans un tube et en route pour le thermocycler pour entre 25 et 40 cycles. Le réglage dépend de vos oligos et de vos attentes. Classiquement on a un préchauffage à 95°C durant 2-5 minutes. Puis les cycles (dénaturation 95°C 30 secondes, hybridation 60°C 30 secondes, et élongation 72°C 30 secondes).  [...]

différence d'espèces

homo sapiens et homo néanderthalensis. Selon les analyses ADN qui ont été réalisées, il semble établi qu'il n'y a pas pu y avoir de descendance entre les deux espèces. Sauf que l'on a découvert au Portugal, le squelette d'un enfant qui présente des caractéristiques d'hybridation (Revue Pour la Science - juillet 2005).  [...] L'hypothèse de non hybridation est basée, à ma connaissance, sur le fait que les séquencements d'ADN mitochondrial réussis sur des fossiles de Néanderthalien montrent une différence avec le notre nettement supérieure à la variabilité actuelle, et donc qu'il n'y aurait aujourdh'ui aucune descendante par ligne maternelle d'une Néanderthalienne.  [...]