• Santé - Membrane, Détergent, Protéines

Solubilité des protéines et role d'un acide biliaire

Ca a quelque chose a voir avec le fait que les détergent détruisent les membranes biologiques Car dans ce cas l'utilisation de détergent permet de séparer la protéine de la membrane dans laquelle elle se trouve pour la mettre en solution.  [...] En fait, l'ajout de détergents non dénaturants à une membrane biologique en solution provoque l'insertion de molécules de détergents (amphiphiles) dans la membrane, et le départ de constituants membranaires, qui s'assemblent en micelles (phospholipides + détergents), jusquà un équilibre membrane saturée en détergent - micelles saturés en phospholipides ou protéines.  [...]

[Biochimie] tampon de lyse

Il me semble que le CHAPS (détergent doux) est utilisé pour récupérer les protéines membranaires car il a l'avantage de solubiliser les membranes sans dénaturer les protéines (à la différence de détergent fort comme le SDS). Le triton 1% est un peu léger seul dans ton cas, il n'a pour effet que de déstabiliser la membrane plasmique provoquant sa rupture.  [...] j'ai lysé mes cellules par un tampon de Karla au Bertin,le tampon renferme dees antiprotéase,PMSF,NAF,EAU,Napp.Je cherche aussi bien des protéines membranaire et du stress oxydative certaine sont cytosolique,c'est bisard j'ai fais un dosage BCA j'ai des concentrations trés faible en protéine entre é 2 et 5 mg/ml mais c'est jouable pour déposer en faisant l'éléctrophorése à la fin du transfert j'ai révéler au ponceau il n'ya pas eu de transfert sur ma membrane et effectivement à la révalation d'une protéine j'ai rien vu au chémidoc alors que les marqueurs ont transférer.  [...]

Immunoblot

Entre la migration sur gel et l'autoradiographie tu as en plus une étape d'électro-transfert qui comme son nom l'indique permet simplement de transférer les protéines du gel vers une membrane (que tu vas ensuite utiliser pour faire l'autoradiographie), encore une fois grace à un champ électrique (car le sprotéine sont toujours chargées négativement).  [...] Le western blot consiste en une migration des protéines dénaturées au beta mercaptoethanol et SDS dans un gel de polyacrylamide+SDS (détergent qui va dénaturer les protéines et les charger), un transfert sur membrane et une révélation grâce à des anticorps marqués.  [...]

[Biochimie] extraction protéines membranaires à partir de tissu cérébral congelé (pour étude de co-IPP)

Pour effectuer une co-IP sur des protéines membranaires, je pense qu'il vaut mieux opter pour un détergent doux. Le CHAPS est souvent utiliser pour les co-IP car il est très doux. Un détergent trop fort dénature les protéines et les interactions entre les protéines sont très sensibles à la structure 3D.  [...] J'ai trouvé ce détergent. N-dodecyl-ß-D-maltoside, savez-vous s'il conserve les interactions entre deux prot membranaires (récepteur canal + protéine régulatrice) Car j'ai malheureusement lu que le CHAPS casse les interactions entre les protéines membranaires, donc ce n'est pas bon pour moi ( Useful for solubilizing membrane proteins and breaking protein-protein interactions ).  [...]

[Biochimie] Interaction protéine/protéine - ultrasons

d'abord le cerveau est plongé dans l'azote liquide, et ensuite isopentane pendant 10 sec avant de le conserver à -80°C... D'ailleurs pendant que j'y suis, penses-tu que ce protocole peut abîmer les membranes nucléaires, ce qui pourrait contaminer les protéines du cytosol par des protéines nucléaires ou inversement En effet, je vais aussi faire un fractionnement subcellulaire avec un tampon sucrose EGTA MgCl2, inhib proteases.  [...] ah je ne pense pas que ce genre de tampon soit idéal pour extraire des protéines ancrées à la membrane (pas de détergent fort), mais je ne suis pas un spécialiste de ces protéines.  [...]

[Biologie Moléculaire] Compréhension d'article.

1- Je ne comprend pas l'action du détergent (n-octylglucoside) dans la fig.4. Je me demande si détergent permet l'entrée du CYP3A4 dans la cellule ou bien il facilite l'ancrage de cette protéine dans la membrane du microsome ou encore il permet de fluidifier la membrane et donc de faciliter l'intéraction entre UGT2B.  [...] 2- En quoi le fait de savoir que le coeur de la protéine est stable et qu'il y a une relaxation des chaînes latérales, permet de dire que les conditions sont réunies pour simuler ConA Native.  [...]

[Biologie Cellulaire] Mise en évidence de protéines membranaires

les membranes dans un détergent et on sépare les protéines sur un gel de polyacrilamide-SDS puis on détecte les protéines par autoradiographie sur gel.  [...] Elles ne synthétisent donc pas les mêmes protéines. Il ne faut pas oublier que les protéines ne sont pas toutes synthétisées au même moment, qu'il y a un turn-over, etc... Cependant, la membrane et sa nature (combien de % de lipides/protéines, protéines trans-membranaires par ex.  [...]

[Biologie Cellulaire] Perméabilisation cellulaire

Goldenthal K.L., Hedman K., Chen J.W., August J.T., Willingham M.C., 1985, Postfixation detergent treatment for immunofluorescence suppresses localization of some integral membrane proteins, The journal of histochemistry and cytochemistry, 33(8).813-20.  [...] Que les détergents lysent les membranes et posent des problèmes pour les protéines membranaires n'est pas un nouveau problème. Mais ça ne veut pas dire qu'il y a une fuite de protéines. Cela veut dire que les protéines membranaires, ont besoin des membranes pour être structurées et que si on abime ces membranes, on abime aussi les protéines membranaires.  [...]

[Biochimie] Sodium Deoxycholate

Application Anionic detergent. useful for extraction of membrane receptors and other plasma membrane proteins and for nuclei isolation.  [...] a mon avis c'est un détergent qui permet au Xgal de pénétrer dans les cytoplasmes pour pouvoir être transformé par la ß-gal. Un peu comme en immunohisto ou on perméabilise au triton ou au tween pour laisser rentrer les anticorps.  [...]

[Biologie Cellulaire] Endocytose par Clathrine ou Caveole?

Une GTPase, la dynamine, est nécessaire à la fermeture des vésicules à clathrine. Les vésicules à manteau perdent leur revêtement grâce aux protéines de la famille Hsp. les deux types de vésicules se transforment en endosomes précoces.  [...] La potocytose est une forme d'endocytose aboutissant à la formation de cavéoles dont la totalité de la membrane est constituée par un DIG (detergent-insoluble glycolipid-enriched domain) qui contient une protéine, la cavéoline, des pompes à protons, des canaux ioniques Ca++, des molécules intervenant dans la transduction des signaux.  [...]