• Santé - Membrane, Anticorps, Protéine

western-blot

tu peux couper ton gel en deux. Une partie de ton gel va être colorée au bleu de Coomassie et l'autre partie va être transférée sur membrane. tu peux grâce à la coloration au bleu déterminer si tu as déposé une quantité équivalente de protéines sur gel.  [...] L'autre solution est d'hybrider ta membrane avec un second anticorps. qui va reconnaitre une protéine témoin (style l'actine si bien sur la taille de ta protéine témoin n'est pas la même que celle de ta protéine d'intérêt).  [...]

[Biochimie] dot plot et overlay

Dans le but d'étudier les interactions entre 2 protéines, je voudrais faire un dot plot pour immobiliser ma première protéine sur la membrane de nitrocellulose, par la suite je voudrais faire un overlay ou j'incube ma membrane de nitrocellulose dans la solution de la deuxième protéine et je révèle les interactions par l'anticorps de la deuxième protéine.  [...] Ce n'est pas une technique très courante a ma connaissance, et à mon avis la façon de procéder dépend énormément de la nature des deux protéines dont on veut étudier l'interaction.  [...]

[Biochimie] Différence western blot / immunoprécipitation

Ce sont deux techniques qui n'ont absolument rien à voir. Le Western Blot consiste à révéler la présence d'une protéine sur une membrane grâce à des anticorp, tandis que l'immunoprécipitation consiste à isoler une protéine -éventuellement en complex avec d'autres protéines/RNA/ADN - à partir d'un lysat.  [...] Du coup cette raison me semble valable et j'y avais pensé, c'est mieux d'avoir la seule protéine sur la membrane plutôt que toutes les autres avec, même si l'anticorps n'est censé révéler que la protéine d'intérêt.  [...]

Matériels et méthodes | Dossier

Le but ensuite est de pouvoir repérer les protéines étudiées sur le support. Pour cela, la membrane est incubée avec un anticorps primaire capable de reconnaître la protéine recherchée et de la fixer, puis un anticorps secondaire marqué à la peroxydase est ajouté au milieu afin qu'il puisse se fixer sur le premier anticorps.  [...] L'anticorps primaire polyclonal de chèvre (TEBU), correspondant à l'isoforme de la protéine kinase C recherchée, est dilué 1000 fois dans la solution pour western blot à laquelle il est ajouté du lait et de la sérum albumine bovine concentrée à 1%, puis il est mis en contact avec la membrane pendant une nuit à 4°C ou pendant 1,5 heure à température ambiante.  [...]

[Biochimie] le native PAGE !! et western blot "natif"

en effet j'ai une proteine positive à faire migrer pour cela j'avais inversé les bornes lors de l'electrophorèse afin qu'elle puisse migrer tranquillement vers le moins et pareil lors du transfert (sauf que la j'avais inversé la membrane et le gel) et le resultat à la fin est assez surprenant vu que mon anticorps semble detecter quelque chose mais ca ne donne pas des bandes mais on dirait juste une membrane degueu.  [...] Une photo pourrait peut être aider, c'est difficile a dire sans voir tes résultats, même si tu précise que c'est moche, c'est mieux de voir moche comment.   [...]

[Biologie Moléculaire] Western blot

Elle se fixe aussi sur les sites spécifiques, mais l'anticorps a une affinité plus grand pour ces sites et déplace donc la protéine aspécifique pour s'y fixer. Ce qui n'est pas (moins) le cas avec le sites aspécifiques.  [...] La membrane ne peut plus coller de protéines aux endroits où des protéines s'y sont déjà fixées. Il reste cependant une surface importante encore adhésive où l'anticorps, qui est une protéine, se fixera. Pour l'empêcher on incube donc la membrane en présence de protéines, ainsi elle ne pourra plus scotcher l'anticorps, ce sera en quelque sorte comme si du ruban adhésif avait été souillé par de la poussière.  [...]

[Biologie Moléculaire] Techniques de transfert

La technique utilise l'électrophorèse sur gel de polyacrylamide pour séparer les protéines, préalablement dénaturées, selon leur masse. Les protéines sont ensuite transférées depuis le gel sur une membrane (typiquement en nitrocellulose), où elles sont exposées à un anticorps spécifique de la protéine d'intérêt.  [...] Il est possible grâce à cette technique de détecter la présence d'une protéine dans un tissu, d'évaluer sa taille, sa concentration, les variations de cette concentration, effectuer des comparaisons de concentrations entre différents groupes, etc.  [...]

détection de l'epo?

Puis, a pH acide (pour que la liaison proteine-AC soit plus faible), ils mettent une nouvelle membrane au dessus du gel (d'ou le nom du test double blotting). Dans un champ éléctrique, les anticorps migrent vers la cathode situé au dessus de la deuxieme membrane et se fixent donc sur celle ci.  [...] l'éléctrophorès e dure environ 30 minutes. Puis on incube la membrane avec une solution contenant des anticorps anti-EPOhumains provenant de la souris. On lave, puis on transfert les anticorps sur sur une nouvelle membrane (double blotting membrane) par electroblotting.  [...]

[Biologie Moléculaire] Membrane plasmique

En plus de fournir de l'énergie, les protéines servent à la fabrication des armes du système immunitaire. les enzymes, les anticorps… Autant d'éléments essentiels pour combattre l'infection.  [...] On parle pas des protéines ou cholestérol libre mais ceux de la membrane, on reste dans le cadre de la membrane, j'ai du mal à voir une protéine transmembranaire devenir un anticorps ou une enzyme.  [...]

[Biochimie] Questions Western Blot

-de retenter le coup avec ta membrane uniquement si tes anticorps sont de bonne qualité / ta protéine se révèle facilement. Si c'est pour une hybridation plus délicate, tu risques d'avoir un résultat de mauvaise qualité.  [...] - si l'activation de la membrane la rends hydrophile et est utile pour le transfert. pourquoi faudrait-il la réactiver avant de repasser un anticorps dessus.  [...]