• Santé - Membrane, Anticorps, Marque

Matériels et méthodes | Dossier

Le but ensuite est de pouvoir repérer les protéines étudiées sur le support. Pour cela, la membrane est incubée avec un anticorps primaire capable de reconnaître la protéine recherchée et de la fixer, puis un anticorps secondaire marqué à la peroxydase est ajouté au milieu afin qu'il puisse se fixer sur le premier anticorps.  [...] La membrane est ensuite lavée 4 fois 10 minutes avant de mettre l'anticorps secondaire de singe (Nordic), marqué à la peroxydase, et qui est dirigé contre les chaînes lourdes et légères des anticorps primaires. Il est dilué 10 000 fois dans le même tampon que l'anticorps primaire, cette étape se fait pendant 45 minutes à température ambiante.  [...]

[Biologie Cellulaire] Recyclage d'une protéine à la membrane.

Voilà j'ai une petite question je dois démontrer la dynamique d'un recyclage d'une protéine à la membrane plasmique, comme c'est un travail en groupe une des techniques qui a été évoquées est celle d'utiliser un Anticorps qui marquerait le récepteur par un épitope extracellulaire.  [...] Le mécanisme a été compris par notre groupe et maintenant nous devons trouver une publication qui traite ce procédé et qui de préférence aurait un Ac marqué avec un fluorophore. Le mieux serait d'avoir une image avec une cellule marquée sur ces récepteurs extérieurs non internalisés marqués avec un Ac primaire(rouge) et un seconde d'une autre couleur (vert), discriminant la membrane et un anticorps internalisé marqué (rouge), pour pouvoir faire un différentiel.  [...]

Matériels et méthodes | Dossier

L'anticorps primaire polyclonal de lapin (TEBU), correspondant à l'isoforme de la cyclooxygénase recherchée, est dilué 1000 fois dans la solution pour western blot à laquelle il est ajouté du lait concentré à 1%, puis il est mis en contact avec la membrane pendant une nuit à 4°C ou pendant 1,5 heure à température ambiante.  [...] La membrane est ensuite lavée 2 fois 10 minutes avant de mettre l'anticorps secondaire de singe (TEBU) dirigé contre les chaînes lourdes et légères des anticorps primaires et marqué à la peroxydase. Cet anticorps est dilué 1000 fois dans le même tampon que l'anticorps primaire, cette étape se fait pendant 45 minutes à température ambiante.  [...]

[Biologie Cellulaire] La cellule mystère.... - Page 21

bon... c'est une observation en microscopie confocale par immunofluorescence, en rouge, c'est bien de la tubuline. La légende de la photo ne parle pas de marquage PE mais d'un anticorps dirigé contre la ß-tubuline. Il y a les points verts le long des microtubules.  [...] Bon je réponds vite fait à ta question..Le processus en cours c'est le transport vésiculaire antérograde entre le golgi et la membrane plasmique. Le golgi étant marqué en vert(Cy5 peut -être comme marquage, ou tout simplement GFP )). Pour le marquage en vert, soit ils ont fait un pulse avec l'expression de la molécule fusionnée avec la GFP ou son ciblage par un anticorps, suivi d'une chasse pour que le RE ne soit pas marqué.  [...]

Test ELISA ??

On incube et on fait un lavage, on ajoute un 2 eme anticorps marqué donc anticorps anti anticorps marqué. Incubation lavage. On ajout des substrat coloré, et ceux ci vont réagir avec l'enzyme on obtiendra un produit coloré, qu on mesura la densité optique.  [...] D'autres techniques existent. si le récepteur est effectivement taggé, suivant les propriété de ce marquage, il est possible lorsqu'il y a interaction avec l'anticorps secondaire via le primaire, d'exciter le marqueur du récepteur qui réémet de l'énergie vers l'anticorps II, lui-même couplé à un fluorophore.  [...]

Test ELISA

une question sur le test ELISA dit indirect. pourquoi passe t-on par un anticorps secondaire marqué, au lieu de marquer directement l'anticorps primaire.  [...] Mieux vaut avoir des anticorps anti souris couplés à ton marqueur. Tu les garde en stock et tu les utilise indifferament de l'anticorps primaire tant qu'il est de souris. Donc plus besoin de bidouiller ton anticorps precieux.  [...]

[Biologie Moléculaire] Un anticorps marqué par un fluorochrome peut-il se fixer à un acide nucléique?

J'ai une petite question... est-il possible d'utiliser des anticorps marqués par un fluorochrome pour détecter la présence d'ARN et d'ADN au sein d'une cellule.  [...] Je débute en bio mol et je me demande si un anticorps n'est pas trop gros pour pouvoir se fixer à un acide nucléique... j'ai entendu parler des puces à ADN mais je ne crois pas qu'il s'agit d'anticorps.  [...]

[Immunologie] [Immuno]Technique RIA ou Dosage Radioimmunologique

Ce genre de test peut egalement permettre de comparer l'affinité de 2 anticorps pour une meme molécule. plus un anticorps est affin, moins il en faudra pour deplacer l'anticorps marqué.  [...] Maintenant pour la valence oui un anticorps a 2 paratopes mais une façon de le prouver est à partir d'une représentation de Scatchard où on peut à la fois trouver la constante d'affinité.  [...]

immunofluorescence

la méthode amplificatrice qui reprend un elisa indirecte ou indirect ssauf que l'anticorps ou l'antigène est marqué plusieurs fois.  [...] la méthode de compétition. un anticorps (ou aussi un antigène) est coaté au fond du puit. mais tu rajoute ensuite 2 antigène dont un est marqué et de concentration connue et l'autre est celui recherché.  [...]

[Biotechnologie] marquage radioactif

Ben non ce n'est pas la même chose, les radio-anticorps sont des anticorps marqué, et la radio-immunoscintigraphie est une méthode qui utilise ces radio-anticorps dirigé contre des antigènes tumoraux.  [...] Pour doser un anticorps, on utilise des supports auxquels l'antigène (plus ou moins purifié) est fixé. l'échantillon est appliqué sur le support qui est ensuite rincé. la quantité d'anticorps retenue sur le support est mesurée par une anti-immunoglobuline marquée (celle-ci est généralement spécifique d'une classe d'Ig, ce qui permet de savoir si l'anticorps est une IgM ou une IgG).  [...]