• Santé - Marqueur, Poids, Protéines

[Biochimie] Marqueur de poids moléculaire-protéines

je n ai pas de marqueur de poids mléculaires pour protéines pour le déposer sur gel d'acrylamide afin de situer la taille de ma protéine, que pourrais je utiliser comme indicateur de poid (et si possible chaque produit avec son poids correspondant).  [...] Et bien fait un tour dans ton labo et trouve des protéines pures dont tu connais la masse moléculaire et dépose les sur gels.  [...]

plasmides

Je vais extraire (en utilisant la technique de lyse alcaline) des plasmides bactériens à partir des bactéries (rhizobiums) nodulant certaines plantes légumineuses, mais je veux savoir (après séparation sur gel par électrophorèse) qui ‘il est le marquer du poids que je dois utiliser pour savoir la taille des plasmides sachant qui une bactérie peut héberger un à plusieurs plasmides de taille variable.  [...] mais le problème c'est que les plasmides sont circulaires et les marqueurs commerciaux sont souvent des fragments d'ADN linéaire.  [...]

Marqueur de poids moléculaire protéique coloré

Je cherche à faire moi-même mon marqueur de poids moléculaire pour des raisons d'économie. Connaitriez-vous un moyen pour faire un marqueur pré-coloré soi-même Grâce à ces marqueurs, je peux suivre la migration des protéines en direct.  [...] Disons que nous avons accès à des stocks de protéines pures à peu près gratuitement. D'après la marque utilisée, 500ùl de marqueur pré-coloré monte déjà à 95¬...donc oui ça pourrait être moins cher.  [...]

[Biochimie] électrophorèse SDS PAGE

Je travaille avec des protéines recombinantes. Avant j'avais des bandes extraordinaires et bien claires ms dernièrement la séparation ne se fait pas comme il faut et n'arrive pas au front de migration.  [...] Je dépose pr le moment juste le marqueur de poids moléculaire ms j'obtiens que des bandes sérées et très proches et qui restent en haut du gel de séparation.  [...]

[Divers] Probleme western blot!!

Bonjour, depuis quelques temps j'ai un problème avec mes western, il n'y a pas de proteine de haut poids moléculaire. pourtant comme vous pouvez le voir il ne s'agit pas d'un problème de transfert car certain échantillon ainsi que le marqueur ont des proteines de haut poids.  [...] La c'était 75ug mais ca me le fait a 50 et 100ug de proteines. les échantillons n'ont pas était chauffé. Ils ont juste était préparé le jour précédent le western (lammly buffer ajouté) et congelé, gel préparé également le jour d'avant (mis au frigo dans su tampon d'éléctrophorèse).  [...]

[Biologie Moléculaire] Vérification transfert W.Blot

L'utilisation d'un marqueur de poids coloré permet aussi de s'assurer immédiatement que le transfert s'est bien déroulé (i.e. que les protéines ont été transférées sur la membrane), mais ne montre pas que le transfert a été homogène sur toute la membrane à l'inverse du rouge ponceau.  [...] Colorer le gel après le transfert histoire de voir si il y a encore les protéines dessus (et si il n'y en a plus prier pour qu'elles soient sur ta membrane). C'est pas la meilleur chose à faire.  [...]

[Identification] Identification d'une protéine sérique

N'ayant pas utilisé de marqueurs de taille, je ne saurais vous dire à quelle taille correspond cette bande. J'ai recherché à quelle protéine sérique correspond cette bande. Mais, je dois reconnaître que pour le moment je n'ai pas trouvé, puisque dans les différents bibliographiques il est dit que l'albumine est la protéine qui migre le plus loin lors de ce genre d'électrophorèse.  [...] Je te conseille de refaire migrer les échantillons avec le marqueur de poids moléculaires. On peut aussi envisager qu'il s'agisse de protéines non sériques (problèmes de purification), d'éventuels précurseurs ou bien au contraire de produits de dégradation de protéines sériques.  [...]

[Biologie Moléculaire] Page sds

Je n'ai jamais été un pro des migrations longues durées, mais dans le cas de grosses protéines, je réaliserai un migration de 6-8h (donc sur la journée) à 80-100V (l'idéal serai que la bande des 250kDa de ton marqueur de taille soit au milieu de ton gel). Tu va donc faire sortir du gel toutes les protéines de faible poids moléculaire.  [...] La différence en poids moléculaire (et donc longueur et/ou complexité) entre protéines est énorme. Mais la dénaturation est là pour simplifier leur structure (il n'est censé resté que la structure primaire), et le SDS va camoufler les acides aminés de la protéine et en profiter pour uniformiser la charge.  [...]

[Biochimie] Migration Western Blot

Le front de migration n'est pas net (plus une sorte de flou bleu qu'une bande), et les protéines ne se séparent pas bien. En Coomassie le bas du gel ne présent pas de belles bandes discrètes. Pourtant le marqueur lui migre très bien.  [...] Donc les protéines sont ok jusqu'à une certaine limite qu'on voit bien après ça devient flou... Pourtant le front de migration (un peu épais comme à son habitude) était au niveau de la bande verte du marqueur (tout en bas à gauche...).  [...]

[Divers] Albumine dénaturée

Je dirais masse apparente lorsqu'on détermine la taille de la molécule par comparaison avec un marqueur de poids moléculaire. Mais cette unité est aussi employée dans la détermination précise des masses moléculaires, où on retrouve bien 1 Da = 1 g/mol. Les bases de données comme expasy donnent la masse réelle de la protéine en Daltons par exemple.  [...] Les protéines coagulent sous l'action de divers agents physiques (chaleur et action mécanique) et agents chimiques (ions inorganiques, métaux lourds).  [...]