• Santé - Marqueur, Migration, ARN

[Biologie Moléculaire] pb dosage ARNtotal spectro

Oui je retrouve de l'ARN...mais je vois peu la bande qui correspond à l'ARN 28S. Je vois bien la bande qui correspond au 18S + smear = ARNm. (il faut dire aussi que je n'ai pas de marqueur de migration d'ARN, du coup je mets comme marqueur du marqueur 1kb ADN double brin alors les tailles les distances de migration de correspondent pas entre mes ARN et le marqueur).  [...] La dilution que tu utilises est trop forte. Pour ta migration avec l'ARN, laisse tomber le marqueur de taille car les tailles sont differentes entre ADN et ARN. Perso, dans ce cas la, je n'en mets pas de marqueurs de taille.  [...]

[Biologie Moléculaire] éléctrophorèse d'ADN

1- On fait cela pour les ARN, pour éviter que le gel ne présente des formes structurées des ARN et non les formes linéaires que l'on recherche pour déterminer la taille de chaque bande. Sans dénaturer, le profil de migration ressemble pratiquement à un marqueur de PM.  [...] Ceci dit, il est possible que tu es fait migrer des produits de digestion. dans ce cas, l'incubation à 65°C était destiné à inactiver l'enzyme de restriction, pour éviter qu'elle ne continue de couper (spécifiquement puis beaucoup moins) le temps de la migration.  [...]

[Génétique] hybridation adn/adn : technique de southern blot

Ensuite, j'ai effectué une électrophorèse en gel d'agarose à 1%. la migration à duré 1heure environ, à 120volts. Le problème qui se pose est qu'à l'issue de la migration, les fragments des différents puits ont très peu migrés, puisqu'à peine 3 ou 4 bandes sont visibles en haut du gel.  [...] - temps de migration trop court, mais une migration de mon marqueur jusqu'en bas du gel semble contredire cela.  [...]

[Biologie Moléculaire] ARN et contaminants

Ensuite, pour tes manips sur gel, pense à mettre un marqueur de taille, c'est un controle indispensable pour pouvoir comparer la migration de tes échantillons avec quelque chose de connu (le marqueur). Cela te permet aussi de détecter tout problème de migration (pas assez ou trop migré par exemple ).  [...] Comme je pense que tu as quand même fait suffisement migré (voire trop si c'est de la manip dont tu parlais dans un post précédent) (le colorant bleu ayant migré jusqu'au 1/3-2/3 du gel. A l'inverse d'un gel de protéine, on ne fait jamais sortir le bleu sur un gel d'agarose), il n'est pas possible que ce ne soit que des ARN, car dans ces conditions (gel agarose 1%), il faudrait que tes ARN fassent plus de 20-30kb pour être cette pattate.  [...]

extraction ARN

je fais des extractions au trizol. la première fois j'ai lancé avec trizol invitrogen qd j'ai fait mon profil de migration j'ai eu les 2 bandes (18 et 28S).  [...] Je ne connais pas du tout les plantes, mais en tout cas d'accord avec malesore pour dire que c'est largement exploitable. Cependant on dirait quand même qu'il y a une dégradation partielle. La prochaine fois sois un peu moins radin en temps de migration.  [...]

[Biochimie] Migration Western Blot

Peut-être que tu charges trop de protéines Le fait que le profil de migration du marqueur moléculaire soit OK indique que le pb vient de tes échantillons -. vérifier donc le tampon de charge (il semblait marcher avant) et ton matériel initial...tu resuspends combien de culot de bactérie Essaie avec moins.  [...] Donc les protéines sont ok jusqu'à une certaine limite qu'on voit bien après ça devient flou... Pourtant le front de migration (un peu épais comme à son habitude) était au niveau de la bande verte du marqueur (tout en bas à gauche...).  [...]

[Biologie Moléculaire] identification gène PCR

J'ai fait une expérience sur l'insertion d'un fragment d'un gène sur le plasmide, et j'ai obtenu une photo des différentes séquences d'ADN via électrophorèse en gel d'agarose. La question est de connaitre le poids moléculaire de ma séquence, et je ne sais pas comment (c'est en bp).   [...] En parallèle de tes migrations tu as du déposer un marqueur de poids moléculaires. Qui te permettra de connaitre approximativement la taille de tes fragments. Si ce n'est pas le cas, tu n'as plus qu'a refaire une migration avec ton marqueur.  [...]

[Biologie Moléculaire] éléctrophorèse et PCR

..). Ne pas oublier de faire co-migrer un marqueur de taille. A la fin de la migration il te suffit de vérifier que ton produit est présent et unique (spécificité d'amplification) et a la taille attendue (par rapport au marqueur de taille).  [...] Un gel à 3%, ca me parait excessif pour séparer un produit de 200pb, je suppose que le temps migration doit être assez grand Personnellement pour 200pb, 1,5% suffit largement à 100V 25min. Enfin c'est mon avis.  [...]

[Biochimie] Sds page

Vous pouvez bien entendu faire varier la tension pendant la migration (une pénétration des protéines en douceur dans le gel, suivit d'une migration plus énergique).  [...] De manière plus pratique, le voltage va déterminer la vitesse de la migration des protéines (et ions) dans le gel. L'ampérage lui indique la résistance électrique qu'impose le gel (et également la chauffe du matériel). Si il n'y a pas d'ampère détecter (ce qui ne veut pas dire qu'il n'y en a pas), le matériel n'est pas/peu conducteur.  [...]

[Biologie Moléculaire] Page sds

Je n'ai jamais été un pro des migrations longues durées, mais dans le cas de grosses protéines, je réaliserai un migration de 6-8h (donc sur la journée) à 80-100V (l'idéal serai que la bande des 250kDa de ton marqueur de taille soit au milieu de ton gel). Tu va donc faire sortir du gel toutes les protéines de faible poids moléculaire.  [...] Si ce n'est toujours pas bon, tu peux lancer la migration pendant 16h (sur la nuit) à 60V. Le lendemain, tu check l'avance des bandes du marqueur, et tu peux accelérer à 100V pour plusieurs heures si ce n'est toujours pas bon.  [...]