• Santé - Marqueur, Membrane, Révélation

[Biochimie] Southern Blot

Le problème c'est que ce marqueur de taille n'est pas apparue sur la membrane après révélation.  [...] En fait, je ne comprends pas pourquoi tu veux que ton marqueur de taille soit visible vu que ta sonde va s'hybrider uniquement sur l'ADN que tu étudies non.  [...]

[Biochimie] migration sds page

Après la migration, je fais un transfert et je vérifie ensuite par du rouge ponceau la qualité de la migration et du transfert. Ensuite je fais une marquage anticorps. Le problème est donc que je ne fais pas de photo au ponceau, je le rince direct et je sature ma membrane pour la révélation.  [...] Je commence par vérifier la qualité du transfert par une coloration rouge ponceau, et c'est là que je me rends compte de la qualité de la migration de mes protéines. Après le rouge ponceau je rince la membrane dans du PBS et je fais une immunorévélation de ma (mes) protéines d'intérêts.  [...]

dot blot- southern blot

Le southern est une technique de mise en évidence d'une séquence d'ADN. Il suffit de faire migrer l'ADN sur gel d'agarose, ensuite on fait une migration sur membrane, puis une révélation avec une sonde marqué.  [...] Cette technique a été mis au point par monsieur Southern, par la suite, pour la recherche des ARN et des protéines, le northern et southern ont été mis au point, et le nom est donc une blague par rapport au nom de Southern.   [...]

Immunoblot

Non. La migration c'est lorsque le sprotéines migrent selon leur masse moléculaire dans le gel. Ensuite le transfert permet de changer ce sprotéines de support. on les passe du gel à une membrane. Le transfert utilise aussi le courant électrique mais ce n'est pas comme la migration.  [...] Le western blot consiste en une migration des protéines dénaturées au beta mercaptoethanol et SDS dans un gel de polyacrylamide+SDS (détergent qui va dénaturer les protéines et les charger), un transfert sur membrane et une révélation grâce à des anticorps marqués.  [...]

Matériels et méthodes | Dossier

L'anticorps primaire polyclonal de lapin (TEBU), correspondant à l'isoforme de la cyclooxygénase recherchée, est dilué 1000 fois dans la solution pour western blot à laquelle il est ajouté du lait concentré à 1%, puis il est mis en contact avec la membrane pendant une nuit à 4°C ou pendant 1,5 heure à température ambiante.  [...] La membrane est mise au contact du luminol pendant une minute, puis avec le film photographique pour une durée de 30 minutes. La révélation du film est arrêtée lorsque les taches sont suffisamment nettes et marquées. Ceci permet de visualiser la présence de zones sombres correspondant à l'isoforme de la cyclooxygénase recherchée.  [...]

Matériels et méthodes | Dossier

Le but ensuite est de pouvoir repérer les protéines étudiées sur le support. Pour cela, la membrane est incubée avec un anticorps primaire capable de reconnaître la protéine recherchée et de la fixer, puis un anticorps secondaire marqué à la peroxydase est ajouté au milieu afin qu'il puisse se fixer sur le premier anticorps.  [...] La membrane est mise au contact du luminol pendant une minute, puis avec le film photographique pour une durée de 30 minutes. La révélation du film est arrêtée lorsque les taches sont suffisamment nettes et marquées. Ceci permet de visualiser la présence des zones sombres correspondant à l'isoforme de la protéine kinase C recherchée.  [...]

[Biologie Moléculaire] Western blot sur des echantillons de foie murins - Page 2

Mon 2e problem. Jai strippé mes membranes après la 1ere revelation. Apres blocage de la membrane, jai incubé les ACs 1aire, 2aire etc. Mais à la revelation, plus rien. LES Memes ACs qui avaient marché à la premiere revelation ne donnent plus rien. J'ai un film vierge.  [...] Merci encore pour tes reponses, mais comment immunoprécipiter mes échantillons As tu un protocol CONCERNANT LES solutions acides isotoniques, solution de ß-mercaptoethanol, As-tu des concentrations a me donner Comment les preparer et laquelle marche le mieux.   [...]

[Biochimie] Marqueur de taille

Lors d'un TP de biochimie je devais déterminer le masse moléculaire de protéines par électrophorèse. J'ai pour cela utilisé un marqueur de taille contenant 13 molécules.  [...] Bonjour, c'est assez classique avec les marqueurs de taille, pour les voir toutes il faut des gels à gradient. La solution c'est de se baser sur l'épaisseur des bandes, en général il y en a des plus importantes, ou alors l'agencement entre elle, il faut regarder sur la notice.  [...]

[Biologie Moléculaire] Mise en évidence d'interaction entre molécules

Les auteurs ont d'abord séparé les macromolécules (protéines et acides nucléiques) par FPLC, qui est une technique de chromatographie. Puis ils les ont transférées sur une membrane (de nitrocellulose par exemple) et cette dernière a ensuite été incubée avec des PCEP.  [...] et dans sur la troisième. la même chose que dans la deuxième mais la membrane a été incubée avec du tampon contenant de la BSA au lieu des PCEP.  [...]

[Biologie Moléculaire] Western Blot Transfert sur membrane

Mon problème en ce moment c'est qu'après le transfert sur membrane mes bandes de protéine sont coulantes comme si on les avait frottés tout comme les bandes du marqueur de poids moléculaire.  [...] Ma première révélation pour mes targets proteines utilise des Ac rabbit (ou mouse) et après je voudrais sur chacune de mes membranes faire une révélation d'actine, l'Ac Actine est goat. Goat étant diff de mouse ou rabbit suis je obliger de stripper ma membrane avant d'incuber avec l'Ac 1st d'actine Quel protocole me conseillez vous.  [...]