• Santé - Marqueur, Fragment, ADN

Genes dans l'ADN

Ces séquences peuvent servir à retrouver le gène dans le génome. Le plus rapide c'est d'utiliser une RT-PCR à partir d'un homogénat de tissu qui l'exprime en protéine. On obtient alors un fragment de gène qui peut s'exprimer même chez une bactérie.  [...] on peut aussi utiliser - lorsqu'on connait le gène à trouver - un court fragment de ce gène (repérable grace à un marqueur radioactif) que l'on fait incuber avec l'ADN total de l'individu chez qui on cherche le gène. ce fragment, appelé sonde, se fixera de façon spécifique au gène à repérer et le révèlera grace à son marquage radioactif.  [...]

marqueurs de sélection

- premièrement je ne comprends pas comment le marqueur permet de se rendre compte que le fragment d'ADN qu'onn a voulu inséré dans l'hôte a bel et bien été inseré.  [...] deuxièment, si il faut que la cellule hote soit mutée et qu'il faut utilisé un marqueur pour détecter qu'elle a une mutation et qu'elle a bien recu le fragment d'ADN puisqu'elle continue a vivre, celà veut dire qu'on ne peut pas inséré n'importe quel gène d'interet à une cellule hote.  [...]

[Génétique] hybridation adn/adn : technique de southern blot

- contaminaton des échantillons (je précise que les cones n'ont pas été changés), mais je ne vois pas en quoi cela expliquerait la faible migration. A moins que dans ce cas là, la présence simultanée de plusieurs enzymes aurait engendré des fragments vraiments minuscules, ce qui expliquerait que ceux ci soit sortis du gel.  [...] Mon ADN lambda à un poids moléculaire de 48 502 pb. Et le premier fragment de mon marqueur correspond à 21 226 pb. Or en regardant mon gel, je constate que mon ADN lambda( puit n°4) à migré au meme niveau que le premier fragment du marqueur. comment peut- on expliquer cela puisqu'ils n'ont pas le même poids moléculaire.  [...]

[Biologie Moléculaire] Problème de PCR

Aucune bande qui pourrait montrer une certaine amplificationd'un fragment d'ADN. par contre tout en bas du gel et au niveau de tous les tubes y a une bande de la même taille et même intensité (paraît comme s'il s'agissait de fragments d'ADN dégénérés...) et qui correspond à la plus petite bande du marqueur et qui est située aussi tt en bas.  [...] Le bleu de bromophénol est juste un colorant qui migre comme l'ADN pour suivre l'avancement de la migration. C'est une petite molécule qui migre a peu pr ès à la même vitesse qu'un petit fragment d'ADN. Les bandes d'ADN que tu vois sont les amorces non utilisées dans la réaction et se retrouvent a peu pres a la hauteur du bleu.  [...]

[Génétique] marqueurs dominant et codominant

je un souci qui m'empêche de comprendre les caractéristiques des marqueurs moléculaires c'est en rapport avec les marqueurs dominants et codominant la définition est simple mais ce que je ne n'arrive pas à comprendre c'est comment un marqueur peut apparaître sur gel parce qu'il est codominant (2bandes)et l'autre qui est dominant n'apparaît qu'une seule bande.  [...] je pense qu'un marqueur est fragment d'un qui se lie à une portion de l'ADN cible.  [...]

[Biologie Moléculaire] Clonage

On a coupé l'ADNg avec BamHI et le sous fragment BamHI-BamHI qui confere la thermoresistance a des levures Ts ura- a été sous-cloné au site unique BamHI du vecteur YIp(sans origine de replication) qui contient le gene URA+ comme marqueur de selection.On recupere deux transformants URA3+,Tr1 et TR2,dont on extrait l'ADN.  [...] Cet ADN est digéré par BglII(le plasmide YIp ne contient pas le site BglII et le sousfragment BamHI-BamHI contient un site BglII).L'ADN digéré est analysé par Southern en utilisant comme sonde radioactive le fragment BanHI-BamHI d'une part et le plasmide YIp sans insert d'autre part.Voila les resultats de l'autoradiographie.  [...]

[Biologie Moléculaire] pcr

Le bromure d'éthidium a la propriété de s'intercaler entre les paires de bases des acides nucléiques. Lorsque tu faisun gel, tu mets un marqueur de référence qui contient x fragments de différentes tailles connues. Comme tu connais la taille du fragment que tu amplifies, tu veras lors de la révélation sous UV si ton fragment amplifié est au même niveau qu'un des fragments de ton marqueur de référence.  [...] Le marqueur de référence est placé dans un autre puit situé à la même hauteur. On applique ensuite un courant électrique à ce gel et les fragments d'ADN (naturellement chargés négativement) migrent dans le gel vers la borne positive. Cette migration se fait différemment selon la taille des fragments.  [...]

[Biologie Moléculaire] Polymorphisme de restriction

Quand on utilise le polymorphisme de restriction pour localiser une mutation dans le génome et qu'on utilise donc des marqueurs, je voudrais savoir comment on les a déterminé ces marqueurs.  [...] Ce que vous appelez marqueur c'est simplement une mutation dans un site de restriction qui va faire qu'un fragment d'ADN, obtenu à partir d'un gène donné, va être coupé, ou non, par une enzyme de restriction, selon que le gène est sous la forme d'un allèle, ou d'un autre.  [...]

[Biologie Moléculaire] Electrophorèse

OK, que s'est-il passé pour que, avec BamH1, le fragment produit avec ADN2 de 5000 pb environ, se retrouve avec ADN1 à 3000 pb C'est quoi comme type de mutation.  [...] que s'est-il passé pour que, avec BamH1, le fragment produit avec ADN2 de 5000 pb environ, se retrouve avec ADN1 à 3000 pb C'est quoi comme type de mutation il s'agit d'une D...N de...(nombre) de nucléotides.  [...]

[Biochimie] PCR & Southern Blot

a priori le principe de la PCR n'est pas très bien compris. C'est une technique qui permet d'amplifier un fragment d'ADN spécifique. Sa principale utilisation n'est pas de déterminer la taille de ce fragment. Tu devrais jeter un coup d'oeil sur le net car c'est une technique courement utiliser et tu trouvera des eplication assez facilement.  [...] Si, si tu le fais migrer en même temps qu'un marqueur de poids moléculaire = mélange de fragments d'ADN de taille connue (cela peut être un ADN de ta collection digéré par des enzymes à ta convenance).  [...]