• Santé - Marqueur, Cellules mortes, Culture

[Biologie Cellulaire] Marqueur pour cellules mortes dans une culture.

Lors d'un TP, nous avons mis des progenitors de cellules nerveuses en culture pendant une durée de 16H approximativement, avant de les analyser. Afin de ne pas biaiser les résultats nous aimerions différentier les cellules mortes, mais à ce stade, je doute que cela puisse se faire simplement d'après la morphologie des cellules.  [...] Existe-t-il un marqueur spécifiques des cellules mortes que nous pourrions utiliser (mais pas spécifique de l'apoptose comme ce que j'ai trouvé jusqu'à présent sur le net).  [...]

[Biologie Cellulaire] Culture, viabilité et Entretien de lignées cellulaires.

Classiquement le FDA (fluoresceine diacétate), qui est perméant, marque les cellules vivantes en vert fluo (les jaunes n'étant plus très vivaces) en étant métabolisé (donc cellule encore active), et l'IP3 (iodure de propidium) marque le noyau des cellules mortes en rouge (non perméant, donc entre dans le noyau quand la membrane devient perméable, donc cellule morte).  [...] Le volume de liquide qui correspond à un carreau est connu (soit dans la doc de la cellule de comptage, sinon tu peux trouver ca sur internet). Du coup tu peux calculer le nombre de cellules vivantes/mortes par millilitre et ainsi déterminer le volume dont tu as besoin pour repiquer ta culture.  [...]

Densité bactérienne

Le nombre d'UFC correspond au nombre de cellules vivantes, il se calcule en étalant des dilutions d'une culture et en comptant le nombre de colonies sur chaque boite (1 colonie est issue d'1 cellule vivante de la culture liquide) et en faisant des moyennes.  [...] La densité optique, mesurée au spectrophotomètre, quantifie le nombre de bactérie dans la culture mais certaines cellules mortes sont comptées aussi.  [...]

[Biologie Cellulaire] HEK et nitrogène

Je maintiens mes stocks à -80°C au lieu du liquid nitrogen, est-ce que ces conditions de stockage peuvent expliquer ces problèmes de pousse (les cellules décongelées ont l'air saines et nombreuses les premières heures de mise en culture puis elles restent en suspension et ne s'attachent que très difficilement à la boite... La majorité finit par mourir).  [...] Ce qui pourrait poser problème c'est votre technique de congélation qui dégraderait les cellules. Ensuite une fois à -80°C ça ne bouge pas mais quand vous souhaitez les remettre en culture ben là, vous avez bien des cellules mais elles sont mortes.  [...]

[Biologie Cellulaire] Au secours : Pb à la décongélation de cellules

Pour l'histoire j'utilise du FBS de Life Technologies ( =Gibco) et cela marche très bien en respectant bien les protocoles. Je me souviens avoir une fois oublié des ampoules 2 bonnes heures en salle de culture avant de les mettre au froid. Lors de la remise en culture, les cellules restaient soit quiescentes, soit étaient mortes, sans jamais adhérer.  [...] Ce sont uniquement les miennes qui ne repartent pas. Pourtant, j'ai suivi à la lettre le protocole de décongélation. décongélation rapide de l'ampoule à 37°C puis je mets les cellules dans 5ml de SVF pur, je centrifuge et je reprends dans du milieu RPMI (leur milieu de culture) et enfi je le mets à 37°C, 5% CO2.. Très peu avait adhéré le lendemain.  [...]

[Biologie Cellulaire] Questions "Générales" en Culture Cellulaire Eucaryotes

-Est-il possible de séparer les cellules vivantes des cellules mortes d'une culture sans cytométrie de flux (ou autre appareil couteux) ni gradient Genre par une simple centrifugation à X rpm pendant X minutes.  [...] Pour la séparation des cellules mortes / vivantes, j'ai testé une centrifugation à basse vitesse (300 rpm pendant 4 minutes). Ma collègue me dit que ce matin, les cellules vivantes lui semblent plus nombreuses que les mortes et les débris (ce qui n'était pas le cas hier). A voir si c'est le hasard.  [...]

[Biologie Cellulaire] Qu'est-ce que la cellule subit dans le Formaldéhyde ?

La cryogénisation à l'azote liquide est une mauvaise idée, surtout sans agent protecteur. Ce qui est mortel pour les cellules, ce n'est pas le froid, mais les cristaux de glace qui vont se former. Ces cristaux sont bien méchants, car ils percent les membranes cellulaires =.  [...] mort. Dans l'état actuelle des connaissances, ces personnes sont mortes dès qu'elles seront réchauffés. J'espère qu'un jour, on pourra les réveiller sans les tuer, mais... En culture cellulaire, on congèle les cellules avec un protecteur (du type glycerol).  [...]

conseil culture cellulaire

Tout comme cococcinelle, je leur laisse du temps pour se remettre, cela permet de se débarasser des cellules mortes et de les laisser reprendre la patate.  [...] les bleues sont mortes. ) ensuite laisse tranquillement les cellules adherentes se diviser dans ta boite, cela peux prendre +/- de temps selon la quantité de cellules vivantes dans ta boite, pense à changer le milieux de culture et quand tu arrive à confluence tu peux passer ta culture pour de nouvelles générations.  [...]

[Biologie Cellulaire] Effets de la congélation

Le premier avec uniquement le milieu de culture ordinaire (Sérum de Veau Foetal SVF) donnait à la fin 100% de cellules mortes.  [...] Le second avec un mélange 10% de DMSO 90% de SVF ainsi qu'une décongélation lente donnait 30% de cellules mortes. Avec le même mélange mais une décongélation rapide (et c'était le protocole classique de cette unité de l'INSERM), on avait 25% de pertes. La décongélation rapide est donc un avantage.  [...]

Le récepteur de l'élastine-laminine, son rôle dans le vieillisement vasculaire | Dossier

D'autres sites reconnaissent des séquences retrouvées dans l'élastine et la laminine. La présence de ce récepteur a été détectée sur des cellules mésenchymateuses ( fibroblastes, chondrocytes, cellules musculaires lisses), des-cellules mononucléées ( monocytes, PMN, lymphocytes ) ainsi que sur des cellules gliales.  [...] Figure 2. Augmentation de la proportion de cellules mortes (en % sur les ordonnées) dans une culture de lymphocytes T humains, en présence de concentration croissante de peptides d'élastine (échelle logarithmique en abscisses, en lig/ml). Deux préparations de k-élastine ont été utilisées, de plus faible (10 kD moyen) et de plus haut (75 kD moyen) poids moléculaire (33).  [...]