• Santé - Marque, Phrase, Protéine, Anticorps, Fonction, Analyse

[Biologie Moléculaire] Etude d'une protéine

Bonjour à tous. alors voila mon prof en amphi dicte un peu vite et j'ai marqué une phrase qui dit pour etudier une proteine isolée on lui faire developper des anticorps pour voir sa fonction qqun pourrait m'expliquer c'est dans le cas d'une analyse de proteine que l'on peut isoler.  [...] 1°/ Pour étudier une protéine, on peut être amener à réaliser des anticorps qui lui sont spécifiques. Cet anticorps sera ensuite un outil permettant de localiser la protéine dans untel ou untel compartiment cellulaire ou quand on la purifie.  [...]

[Immunologie] Immuno-marquage

Donc on va profiter de cette affinité pour marquer des protéines cibles. Mais pour qu'on puisse voir, on fixe sur les anticorps des marqueurs. Alors ça peut être un marqueur radioactif par exemple, ou un marqueur fluorescent comme ça au microscope on repère bien la protéine cible.  [...] Mais faut savoir que chaque plasmocyte ne sécrète qu'un seul type d'anticorps. On choisira qu'un seul plasmocyte et on va en faire un hybridome( en gros. hybridation entre une cellule cancéreuse et un plasmocyte). Pourquoi on fait ça Tout simplement pour rendre le plasmocyte immortel car dans le corps le plasmocyte a une durée de vie très courte(de l'ordre du dixaine de jours si je me rappelle bien mais on s'en fou en fait ) Et donc voilà on a donc une jolie culture de plasmocytes qui sécrètent tous des anticorps contre la protéine qu'on veut observer.  [...]

Immunomarquage de la rétine du macaque

puis on utilise un anticorps polyclonal anti la protéine d'interet, on rince et on met l'anticorps secondaire anti- anticorps de lapin, marqué par un marqueur fluorescent, dilué dans du PBS contenant 1% d'albumine de sérum bovin pendant 1h à température ambiante.  [...] Bref, ces étapes de saturation permettent de s'assurer que les sites non spécifiques sur la lamelle ne vont pas être détectés par notre anticorps (cela serai ennuyeux). On les recouvre donc avec une protéine bidon, l'albumine contenu dans le sérum.  [...]

[Biologie Moléculaire] Cross-reactive protein ?

C'est une proteine qui n'est pas cense reagir avec l'Ac mais qui reagit quand meme. Il y a donc une bande supplementaire en WB.  [...] Vu la figure, c'est une protéine reconnue par l'anticorps mais qui n'est pas la protéine normalement ciblée par l'anticorps (ici PML). Elle présente un épitope proche de l'épitope reconnu par l'anticorps, elle est donc reconnue par celui-ci. Mais PML sort à quelle taille Car habituellement ce genre de précision n'est marqué que dans le cas où la bande non spécifique peut être confondu avec la bande correspondante à la protéine d'intérêt.  [...]

[Biologie Cellulaire] Marquage par Ac-FITC : du solide ?

Après la période d'incubation, j'aurais ajouté un anticorps anti-[protéine récherchée]. puis un second anticorps marqué au FITC et dirigé contre l'anticorps du complexe précédent.  [...] je ne pense pas que tu aies le choix. Quelle est la localisation cellulaire de ta protéine En immuno généralement on fixe les cellules puis on les perméabilise pour donner accès aux anticorps. Autre chose. ce type d'approche n'est que peu quantitatif.  [...]

[Immunologie] Faire divorcer un couple Ag-Ac

Pour des immunoprécipitations, tu peux peut-être arriver à trouver des conditions analogues à celles que tu recherches pour ta méthode, dans le cas où les auteurs souhaitent récupérer la protéine immunoprécipitée sans son anticorps, et sans la dénaturer c'est encore mieux.  [...] Tu peux aussi regarder les manips où les auteurs effectuent une purification protéique par chromatogrtaphie d'affinité où la phase stationnaire est constituée de billes couplées à un anticorps dirigé contre la protéine d'intérêt. Généralement, ils utilisent la force ionique pour éluer la protéine.  [...]

[Biotechnologie] Test immuno-enzymatique... ELISA

On met en évidence l'anticorps marqué. Si on le détecte, la protéine est présente. Sinon, elle ne l'est pas. Dans le cas où on a attaché une enzyme au deuxième anticorps, on ajoute le substrat pour voir si la réaction se fait, et ainsi vérifier que l'enzyme est présente.  [...] Tu as plein de variations possibles, pour attacher la protéine à détecter (on peut aussi utiliser des anticorps liés à la plaque de test), pour utiliser un ou deux anticorps (si on n'utilise qu'un anticorps, on attache directement le marqueur à cet anticorps), mais c'est toujours à peu près le même principe.  [...]

influence des peptides signaux sur la sécrétion des protéines

Oui, j'ai fait une analyse par Western Blot (2 anticorps, révélation électroluminescente). Je ne retrouve rien dans le surnageant, mais je retrouve la protéine dans la fraction soluble et non soluble après la lyse des cellules.  [...] 4°) tu utilises des anticorps secondaire genre un 488 anti-Rabbit (ta clathrine apparaitra donc en vert) et un 546 anti-mouse (la protéine sera alors marqué en rouge).  [...]

Matériels et méthodes | Dossier

Le but ensuite est de pouvoir repérer les protéines étudiées sur le support. Pour cela, la membrane est incubée avec un anticorps primaire capable de reconnaître la protéine recherchée et de la fixer, puis un anticorps secondaire marqué à la peroxydase est ajouté au milieu afin qu'il puisse se fixer sur le premier anticorps.  [...] L'anticorps primaire polyclonal de chèvre (TEBU), correspondant à l'isoforme de la protéine kinase C recherchée, est dilué 1000 fois dans la solution pour western blot à laquelle il est ajouté du lait et de la sérum albumine bovine concentrée à 1%, puis il est mis en contact avec la membrane pendant une nuit à 4°C ou pendant 1,5 heure à température ambiante.  [...]

[Biologie Moléculaire] Expression de protéines grâce au pGEX. DH5alpha ou BL21?

Pour l'anticorps c'est un anticorps polyclonal commercial dirigé contre ma protéine et qui fonctionne pas mal dans les autres applications pour lesquelle je l'utilise. En revanche ce dont je suis à peu près certain c'est spécificité de ce WB. J'ai co-migré de l'extrait protéique non transformé et la colonne reste totalement vide.  [...] De la même manière j'ai co-migré un extrait protéique obtenu après transformation des bactéries avec un pGEX vide et là aussi la colonne reste entièrement vide. Ces contrôles signifient bien que mon anticorps ne marque pas une protéine bactérienne endogène ou un bidule provoqué par l'insertion du seul plasmide.  [...]