• Santé - Marquage, Protéine, Mitochondries

[Biologie Cellulaire] isolation des mitochondries

Mon but n'est pas spécialement de purifier les mitochondries, mais de pouvoir les différencier des autres organelles, car j'ai marqué une protéine qui devrait aller dans la mitochondrie avec du RFD et au microscope c'est pas claire si c'est une mito ou pas.  [...] Dans ce cas là, t'as pas besoin de purifier tes mitochondries. Ce qu'il te faut c'est un marqueur spécifique de la mitochondrie. Comme ça tu peux voir si il y a colocalisation entre le marquage de ta protéine et le marquage de tes mitochondries. Tu peux utiliser le Mitotracker (Invitrogen je crois) comme marqueur.  [...]

même marquage immunofluorescence dans le vert et le rouge

J'ai réalisé un double marquage immunofluorescent, protéine d'intérêt et protéine mitochondriale et le marquage sort exactement le même, dans un premier temps j'ai pensé que ma protéine se localisait exclusivement dans la mitochondrie. Mais voilà, en marquant la même protéine et une autre protéine non mitochondriale cette fois-ci, le marquage est complètement diffus et les deux marquages se superposent.  [...] Non, en fait j'ai marqué à la fois des mitochondries qui ont un aspect très reconnaissable dans le type cellulaire que j'étudie (ça forme des sortes de patches que je retrouve) et une protéine qui peut être à la fois mitochondriale et diffuse, que je retrouve aussi mais jamais tous les 2 en même temps, c'est comme si j'avais fais du simple marquage.  [...]

[Biochimie] Séparation en gradient sucrose

J'ai envisagé aussi d'analyser la composition lipidique des fractions mais à nouveau je rencontre un probleme. La protéine étant située sur la Mb interne mitochondriale, les DRM qu'on y trouve ont une composition lipidique très particulière et se distinguent surtout par leur richesse en cardiolipine.  [...] Autre chose. la microscopie à transmission avec marquage immunogold de ta protéine. Ainsi tu as accès à l'ultrastructure de la mitochondrie, normalement les rafts sont visibles en microscopie à transmission, mais pour les rafts mitochondriaux je ne sais pas.  [...]

La cellule nerveuse (neurone) | Dossier

Double marquage immunocytochimique d'un astrocyte en culture. En vert-jaune, une protéine spécifique des astrocytes, la GFAP. En rouge, une protéine du métabolisme cellulaire, la lactate déshydrogénase. En bleu-violet, les noyaux des cellules. Karin Pierre, Institut de Physiologie, UNIL, Lausanne, DR.  [...] Culture de neurones corticaux de souris doublement marqués pour une protéine de structure, le MAP2 (en rouge) et une protéine du métabolisme, un transporteur de monocarboxylates (en vert). L'aspect punctiforme de la réaction traduit un marquage de type synaptique.  [...]

mesure de l'expression d'un gene

POur ton marquage metabolique, tu ne fais pas abstraction totalement de la stabilite de la proteine tu n'arriveras pas a marquer une proteine tres instable...sauf si alors tu inactives le proteasome.  [...] Enfin pour le marquage métabolique, je ne supprime pas le biais de la stabilité de la proteine c'est vrai, mais je ne mesure plus que les proteine traduites pendant un temps donné et non pas la quantité totale dans la cellule. Si j'inactive le protéasome je peux optimiser ma mesure c'est cool ça.  [...]

[Biologie Cellulaire] mise en évidence d'une phosphorylation

je travaille sur une protéine dont je voudrais mettre en évidence l'état phosphorylé. J'ai un faible marquage de cette protéine par un anticorps anti-phosphosérine/thréonine mais je voudrais m'assurer qu'il sagit bien d'un marquage spécifique. Pour celà, je regarde si ce signal disparait après traitement phosphatase (CIP ou lambda).  [...] Pour la mise en évidence d'une phosphorylation, dans le cas où le résultat va être publié, il vous faudra forcément un marquage métabolique, je ne pense pas qu'une revue accepte qu'il manque une expérience aussi démonstrative... Si vous avez une idée de la kinase phosphorylant votre protéine, vous pouvez définir le(s) site(s) phosphorylés sur la protéine grâce à des logiciels bioinformatiques et à la séquence consensus de phosphorylation de la kinase (si cette séquence a déjà été définie).  [...]

[Biochimie] Methodes biologie cellulaire

J'ai besoin d'aide. on doit localiser une proteine dans des cellules, on nous demande quel modèle experimental choisir ( je pense à une culture cellulaire ) et pourquoi c est là que je bute. si quelqu'un pouvait m'aider. De plus on me demande quelles caracteristiques doit avoir ce materiel.  [...] Il y a des dizaines de façon de faire. Ca dépend du type de protéine, de sa localisation, du type de marquage souhaité (dynamique vs statique)... Il faudrait plus de précisions.  [...]

ubiquitine et protéasome

Le protéasome se situe au niveau cytosolique non Si ma protéine X d'intéret s'exprime au niveau nucléaire, et si je surexprime la protéine Y permettant d'apporter X à la voie de dégradation. est ce que je peux par un marquage spé de la protéine X montré sa dégradation par exemple si le marquage de X se déplace du compartiement nucléaire vers cytosol.  [...] Pourquoi ne pas simplement marquer le protéasome et la protéine qui va être dégradée pas 2 fluorofores de couleurs différentes. Une juxtaposition des deux marquages pourrait révéler le même compartiment. le protéasome. Je ne sais pas si c'est vraiment réalisable ni si ça suffit pour montrer ce que tu veux mais c'est une idée.  [...]

[Immunologie] expression et phosphorylation de la protéine

Je souhaite avoir une explication pour le faite d'avoir un marquage de ma protéine sous sa forme phosphorylée en immunohistochimie alors qu'au niveau de son expression protéique le marquage est négatif sur la même tumeur. J'explique ça par le spécificité de l'anticorps mais est ce qu'il y d'autres explications.  [...] Les conditions d'hybridation. en WB la protéine est dénaturée, pas forcément en IHC. Certains anticorps ne fonctionnent qu'en IHC.  [...]

Lactate. Comment se déplace-t-il dans le corps humain?

Il me semblait que si l'apport en oxygène est suffisant, et si le muscle ne demande pas trop d'ATP, la cellule musculaire consomme elle-même le lactate produit par la glycolyse (consommation par oxydation par les mitochondries).  [...] C'est frappant sur un marquage succinate deshydrogénase (protéine de la chaine respiratoire, marqueur des fibres lentes) exemple ici.  [...]