• Santé - Marquage, Amorces, Fragments

[Biologie Moléculaire] Pcr

Le marquage des amorces permet effectivement de marquer les fragments amplifiés pour les différencier (la résolution par migration en électrophorèse peut être peut être délicate).  [...] Pour distinguer les fragments facilement, on peut utiliser des amorces couplées à des fluorochromes de couleurs d'émission différentes. Les résultats sont alors présentés, sous la forme d'une succession de pics de couleurs différentes.  [...]

[Biochimie] Demande de definitions

Bonjour, ça pourrait parraître bête mais bon j'arrive pas a serner la signification d' hybridation des amorces ainsi que la polymérisation.Ceci ayant un rapport avec le marquage par multiamorçage ou random priming.  [...] Oui, je ne voulais pas dire que les amorces d'ARN n'existent pas mais seulement que le terme d'hybride n'était pas dû à l'assemblage mi-ADN mi-ARN.  [...]

[Biologie Moléculaire] éléctrophorèse d'1 seul brin d'ADN?

Pour mon TD de bio j'ai l'image de 2 éléctrophorèses (empreinte a la DNase I ) de la région d'un gène.   [...] Comment faire J'ai du mal a savoir l'ordre des étapes a faire... Je pense qu'il y a un marquage de l'ADN puis séparartion des brin par chauffage... Peut etre qu'après on utilise des amorces aussi.. mais comment isoler le brin codant du non codant.  [...]

prédire digestion ADN DNAse1?

Je suis en essai d'un protocole de marquage de sonde. Pour ce faire, je dois digérer mon ADN Bac avec de la DNase 1. La seule information que j'ai c'est qu'il est suggéré d'utiliser 6ul de DNase 1 pour 1ug de BAC DNA de 100kb pendant 2 heures à 15 degrés C pour obtenir des fragments entre 300 et 700 bp).  [...] Pour optimiser l experience, tu peux fixer la quantite d ADN a digerer et utiliser differentes quantites de DNAse et differents temps de digestion et regarder ensuite quelle est la meilleur condition.   [...]

[Biotechnologie] marquage radioactif

Où puis-je trouver des informations (sites, magasines,...)sur ces radio anticorps et sur le procédé de marquage (à l'iode 125 par exemple) des anticorps monoclonaux.  [...] Concernant le marquage, on utilise la protéine A qui a une forte affinité pour les fragments Fc des Ig. On a couplé préalablement cette protéine A avec soit l'iode 125, soit la peroxydase quand on veut éviter d'utiliser la radioactivité.  [...]

[Biologie Moléculaire] Marquage d'une sonde

lors du random Priming (ou marquage par multi amorçage), est-ce que les brins synthétisés par la polymérase à partir des amorces vont se lier à la fin par une ligase, ou bien l'ARN polymérase va-t-elle hydrolyser les amorce ce qui va coller tous les brins, ou bien les brins restent séparés.  [...] Sinon au niveau de la nick translation et de la technique du PCR, lorsqu'on met la polymérase, on sait pas à combien de bases elle va arrêter de transcrire le brin matrice Donc à la fin de ces deux techniques, il y aura pleins de fragments de tailles variables dans le tube De plus la longueur de la sonde va varier puisque la polymérase lorsqu'elle va créer les sondes (en supposant qu'on veuille faire plusieurs sondes pour un même brin matrice) elle ne va pas toujours s'arrêter aux mêmes endroits.  [...]

[Biologie Cellulaire] Marquage à l'iodure de propidium pour suivi du cycle cellulaire

Si j'ai bien compris le principe de cette méthode, la perméabilisation des cellules entraîne la sortie des fragments d'ADN de 180 bp, ce qui fait que l'intensité de fluorescence des cellules en apoptose est inférieure à celle des autres cellules (puisque proportionnelle à la quantité d'ADN), d'où l'apparition d'un pic en subG1.  [...] Pour le marquage IP, comme tu l'as dit, les cellules en subG1 le sont surtout à cause d'une fuite des fragments d'ADN clivés hors de la cellule. Seulement, le clivage régulier de l'ADN internucléosomal est typique d'un processus apoptotique. Dans le cas des autres morts cellulaires, la dégradation de l'ADN peut intervenir plus tardivement dans le cas d'une mort cellulaire par autophagie et/ou est plus anarchique comme dans le cas d'une nécrose.  [...]

[Biologie Moléculaire] Hybridation ADNc / ADNg : besoin de confirmer !

Ça se complique un petit peu, j'émets alors l'hypothèse suivante. sur notre ADNg il y a deux sites de restrictions NcoI adjacents qui donnent un fragment de 1,8Kb. Pour expliquer les 0,8Kb, j'ai pensé à un intron situé au centre de mon fragment d'ADNg NcoI/NcoI.  [...] D'après moi, cette expérience confirme mon hypothèse de présence d'un intron de 0,8Kb sur le fragment d'ADNg de 1,8Kb NcoI/NcoI. En effet, si on obtient deux bandes radioactives, c'est que notre fragment de 1,8Kb est coupé en deux par l'enzyme HindIII & la sonde N hybride avec ces deux fragments.  [...]

[Biologie Cellulaire] La cellule mystère.... - Page 15

alors les machins verts ressemblent bien aux neurones en culture. Une protéine fusionnée GFP à adressage somato-dendritique dirais qui a l'air de s'accumuler edans la voir de sécrétion (ou d'y être associée). Le marquage n'est pas clairement synaptique mais ponculé. Je dirais bien NR2b (loterie).  [...] le marquage DAPI donne certains noyaux tres intenses, petit et clairs...des cellules en train de mourrir...apoptose precoce sans fragmentation nucleaire pour le moment.  [...]

[Biologie Cellulaire] immunofluorescence

Oui j'ai eu le marquage attendu il est présent sur deux photos que j'ai montré. une a le marquage plein, une le marquage contour et une autre le double marquage. Normalement je devrais avoir que le marquage plein donc je ne comprends pas d'où ca vient.  [...] Là sur 40 échantillons. 20 contrôle et 20 malades (je parle notamment du cortex là) j'en ai 6 qui sont avec le marquage attendu et donc 34 avec le marquage perinucleaire. Mais, les échantillons qui ont le marquage périnucléaire ont des endroits dans le cortex où il y a le marquage entier.  [...]