• Santé - Liquide, Cellules, Congélation

[Biologie Cellulaire] Utilisation du FACS

Ils nous ont aussi conseillé de fixer nos cellules soit en formol 2% soit en PAF 4% et de congeler azote liquide pour conserver. J'imagine bien évidemment qu'il faut rincer les cellules fixées avant de les congeler... La congélation est elle obligatoire, j'ai fait de l'immunoloc sur cellules et je n'ai jamais congelé j'ai toujours conservé mes préparation à 4°.  [...] Ma cinétique se déroulerait sur 40 jours et ça va être très difficile de le faire sur cellules fraiches. D'où la mise au point d'une methode de fixation/congélation la moins dénaturante possible. D'après ce que j'en sais la congélation à l'azote liquide devrait vitrifier l'eau ce qui n'endommage pas les cellules au moment de la décongélation mais c'est vrai que j'ai quand même quelques craintes.  [...]

[Biologie Cellulaire] cultures cellulaires primaires

selon lemode opératoire, ils ont congelé les cellules par l'azote à -80 C°, puis ils ont utilisé du réactif DMEM avec un sérum bovin et des antibiotiques pour le milieu de culture.  [...] On dépose (ensemence) les cellules à une faible densité (peu de cellules / cm²) dans des boites ou des flasques de culture dans un milieu approprié (par exemple le DMEM) et éventuellement supplémenté (a.a., antibio, sérum,...).  [...]

durée de vies des spermatozoïdes?

Une congelation rapide dans l'azote liquide evite la formation de critaux de glace qui detruisent les cellules. une fois congelé les cellules peuvent etre conservées pendant tres longtemps.  [...] Juste pour compléter ce qui a déjà été dit. L'étape la plus délicate lorsque l'on travaille sur des cellules congelée dans l'azote liquide (ou à moins 80), c'estla décongélation parce qu'on reprend les cellules dans du milieu de décongélation (milieu de culture additionné d'autres éléments) mais il faut faire attention à prendre uniquement le glaçon de cellules.  [...]

[Biologie Cellulaire] Effets de la congélation

Une réfrigération brutale, par exemple en plongeant l'échantillon dans l'azote liquide les cristaux sont microscopiques et c'est la raison pour laquelle des cellules comme les spermatozoïdes supportent la congélation sans être détruits.  [...] Son inconvénient est sa toxicité pour la cellule. La solution est donc une décongélation très très rapide pour déjà éviter les phénomènes de déshydratation sur le même modèle que lors de la congélation et puis pour obtenir rapidement un milieu liquide qu'on peut retirer tout de suite pour mettre un milieu de culture autour des cellules sans DMSO.  [...]

Conservation du sang

Effectivement, le glycérol est un produit (une solution liquide) connu pour ses propriétés de protection des cellules lors de la congélation (il est pas le seul on peut citer le DMSO également).  [...] le produit est mélangé aux globules rouges et le tout est congelé. Il faudra lors de la décongélation, laver les globules pour enlever le gycérole.  [...]

[Biotechnologie] Protocole congélation de cellules et ELISA

[Biotechnologie] Protocole congélation de cellules et ELISA.  [...] Je vous demande svp de me passer le protocole de congélation des cellules depuis quelle densité cellulaire dans le flask (70% ou 80% ou)... jusqu'au les mettre dans de l'Azote liquide. Si vous avez une image de la boîte où l'on mets les vials je vous remercie encore plus.  [...]

Premier clonage réussi de souris congelées !

Dans ces conditions, l'eau contenue dans les cellules et dans le milieu intercellulaire forme des cristaux au moment de la descente en température, augmentant considérablement la concentration du milieu encore liquide. Avec la formation de cristaux d'eau, qui augmente le volume, cet effet de la congélation conduit à la destruction définitive des cellules.  [...] Au passage, les chercheurs ont pris le soin de vérifier que le milieu ne recélait aucune cellule ayant pu survivre à la congélation, démontrant que l'ADN injecté dans les ovocytes est donc bien celui des noyaux.  [...]

[Biologie Cellulaire] HEK et nitrogène

Je ne l'ai pas fais moi même donc je ne peux pas vous aider d'expérience. Cependant ce qui est certain c'est que la congélation directe n'est pas indiquée. Il faut utiliser des ampoules spéciales que l'on plonge dans je ne sais plus trop quel bidule (pas immédiatement de l'azote liquide) qui va refroidir progressivement les cellules. Ce n'est qu'ensuite que l'on congèle à -80°C.  [...] En général, on met 10% DMSO pour éviter la formation de cristaux d'eau lors de la congélation, cristaux qui, s'ils se forment dans les cellules, vont perforer les membranes. Pensez à quoi ressemble des fruits congelés une fois décongelés.  [...]

[Divers] azote liquide

à cette température il n'y a aucune activité métabolique, les spermatozoïdes peuvent donc être conservés plus longtemps, alors qu'ils ont une durée de vie très courte à température ambiante.   [...] il faut également savoir qu'une hyper congélation rapide évite la formation de cristaux de glace qui détruiraient les membranes cellulaires. Si on refroidit trop lentement une cellule organique contenant tant soit peu de liquide aqueux, on la détruit exactement comme si on l'avait fait cuire.  [...]

Féconder des souris avec du sperme congelé, 15 ans plus tard

par exemple, une souris génétiquement modifiée pour reproduire une maladie humaine. Or le sperme de souris est très sensible à la congélation, que ce soit à -20°C, -80°C ou encore à -196°C (azote liquide ). lors de la cryogénisation, les parois cellulaires des spermatozoïdes se rompent, ce qui les détruit.  [...] Lors de tests complémentaires, les scientifiques se sont rendus compte que cette technique pouvait permettre de récupérer des spermes congelés plus ou moins sommairement, voire même transportés entre le Royaume-Uni et le Japon à l'aide de glace sèche ( glace carbonique ).   [...]