• Santé - Lignée, Stable, Protéine, Intérêt

proteine ou cellule stable ???

est ce que quelqun peut me dire ce que ça veut dire une protéine stable ou une cellule stable ou plutôt tel proteine se stabilise.  [...] Pour les lignées cellulaire, je comprends un lignée stable comme une lignée exprimant stablement une protéine d'intérêt. Il faut mettre en opposition les lignées stables au lignées transitoires. Je m'explique, dans le cas d'expression hétérologue d'une protéine dans une cellule eucaryote on peut soit.  [...]

[Biologie Cellulaire] A quoi sert le co-transfert avec un vecteur de résistance à un antibiotique

C'est pour faire un transformant stable exprimant ton gène d'intérêt. L'idée est de transfecter avec un vecteur codant pour une protéine de resistance à un antibio. Ce vecteur va s'intégrer (évenement très rare), et les transformants (ayant intégré le vecteur de manière stable) seront resistants à une sélection à l'antibiotique.  [...] Donc, utiliser un seul plasmide, tu augmentes tes chances d'intégrer ton gène de résistance et ton gène d'intérêt, et donc probablement passer moins de temps à trouver un clone stable.  [...]

[Biologie Moléculaire] Vecteurs intégratif+inductible

Oui je suis entrain de voir sa. Le pbi-EGFP m'a l'air d'être intéressant. Un vecteur retroviral serait le mieux, mais le plus souvent ils sont associés avec un un promoteur de type CMV trop fort, pour le moment j'ai pas trouvé de vecteur rétroviral inductible d'ailleurs je me demande même si sa existe.  [...] Ce raisonnement n'est pas valable si la GFP n'est pas en fusion avec votre protéine, et que la GFP vous sert de controle de transfection. Dans ce cas ce serait une toxicité due à la GFP, ce qui est connue, mais pourquoi n'est elle pas présente en transitoire Dans ce cas, qu'en est il de l'expression de la GFP dans vos stables.  [...]

[Biologie Cellulaire] Lignée cellulaire en suspension: killing curve et transfection stable

J'ai un léger problème dernièrement, je voudrais transformer de manière stable la lignée cellulaire Daudi qui sont donc des cellules non adhérentes. J'essaie de faire des killing curves pour la Zeocin et la Blasticidin et j'utilise pour cela des 35 mm dishes avec 3 ml de milieu.  [...] Et j'en viens a ma seconde question, lors d'une transformation stable on doit observer l'apparition de foci puis sélectionner ces derniers. Autant je vois comment faire avec une lignée cellulaire adhérente mais pour une lignée cellulaire en suspension, ça m'échappe complètement vu qu'on ne peut pas piquer les foci.  [...]

[Biologie Moléculaire] BSA et saturation

Je m'explique... Je ne comprends comment la BSA peut se fixer aux autres protéines d'une part et empêcher les Ac de se fixer sur les autres protéines... quelque soit la technique westernblot, ELISA, Immunohisto... Pourquoi n'utilise t-on pas plutôt des immunoglobulines qui ont justement la capacité de fixer les protéines.  [...] J'ai une interpretation un peu différente à ce sujet. Tout d'abord, c'est une protéine relativement bon marché et facile à produire, en plus d'être assez stable.  [...]

[Journal club] Extinction de l'expression de gènes par les siRNA : la découverte

Quand meme, je suis moyennement d'accord sur le fait qu'un siRNA est similaire a un KO. Pour avoir expérimenté cela au labo, il est clair qu'en expression transitoire le taux d'inhibition de la synthese protéique est loin d'etre maximale, et meme si on cree une lignée stable exprimant le siRNA on n'arrive pas non plus a 0.  [...] Les problèmes de spécificité ne sont pas spécialement recherchés. Ils peuvent exister mais difficile de connaitre leur fréquence étant donné qu'on ne regarde pas, la plupart du temps, si l'expression de protéines autres que celle d'intérêt est affectée. Je pense que les gens travaillant sur des protéines à forte homologie regardent la spécificité de leur siRNA sur les différents homologues, en dehors de ces cas là, certainement peu de personnes le font.  [...]

[Biologie Cellulaire] La cellule mystère.... - Page 6

Le blanc c'est bien de l'actine, dans des protrusions cellulaires liées à la propulsion de Listeria monocytogenes (mais ç'aurait pu être Yersinia ou Shigella ). on ne voit pas les bactéries sur cette préparation, mais sur l'image du bas des cellules qui ont un aspect fibroblastique.   [...] Ces MDCK sont une lignée stable pour l'actine GFP. Enfin relativement stable car les cellules du haut n'ont pas un niveau d'expression au-dessus du seuil de détection.  [...]

Vaccin VIH

Pourtant il me semble qu'il n'y a pas si longtemps que ça, Futura a fait une actu sur cette dernière découverte, enfin confirmation je dirais plutôt... En fait un domaine d'une protéine de HIV qui s'appelle Gp120 mute peu et en plus de ça on connait un anticorps b12 qui se fixe à gp120.  [...] Le rôle de gp120 est, il me semble, de reconnaitre le CD4 des lymphocytes T, ce qui lui permet de s'internaliser dans ces cellules. Je suppose donc que HIV ne peut pas muter autant qu'il veut cette protéine sinon elle ne peut plus reconnaitre le CD4 qui lui reste stable (enfin le plus qu'il peut ).  [...]

[Biologie Cellulaire] Protéines et liaisons convalentes entre 2 résidus soufrés

Il est inscrit dans un QCM, en tant que item vrai, que la forme protéine Prion est stabilisée par des liaisons covalentes qui s'établissent entre deux résidus soufrés.  [...] Je précise néanmoins un point que je n'ai pas vu sur le wiki en anglais. en dehors de la question éventuelle de ponts disulfure (je te laisse y trouver la réponse), les deux principaux éléments qui stabilisent la protéine prion anormale et les autres peptides amyloides sont la formation de feuillets betas interchaine très stable et l'emboitement quasi-parfait des chaines latérales des acides aminés des différentes chaines.  [...]

[Biologie Moléculaire] Western blot : quelle unité ?

Je le regarderais plus tard. Malgré que ce western ne soit pas beau, il est tout de même interprétable. la protéine est ubiquitinée au bout de 20 minutes et cette ubiquitination perdure au cours du temps, ce qui veut dire, si ces temps sont sur cellules, que l'ubiquitination en question n'est pas de type à adresser au protéasome (K48) et que l'ubiquitination est stable (non réversée par des déubiquitinases).  [...] 200 kDa ce n'est pas non plus énorme en western blot. J'ai travaillé un an sur une protéine de 250 kDa avec un bon anticorps les westerns étaient jolis avec un protocole standard. Je pense que ce problème de smear lors des ubiquitination assay viennent de l'ubiquitination qui peut être une mono-, multi- ou polyubiquitination.  [...]