• Santé - Liaison, Résine, Anticorps

[Immunologie] Immunoprecpitation: liaison de la resine protG avec l'anticorps qui marche pas

Je laisse la résine en contacte avec l'anticorps toute la nuit puis après je lave 3 fois avec du PBS et j'élue finalement dans 50µl de glycine 2.5.  [...] C'est peut-être à cause des charges Avez-vous essayé de laver au tampon Tris-EDTA ou phosphate sans NaCl Quelle résine utilisez-vous.  [...]

[Biochimie] Purification de protéine pour ELISA

Mon principal problème (outre mes connaissances très limitées en biochimie) est que mon laboratoire dispose de relativement peu de moyens, et que je ne peux donc pas faire des anticorps adaptés à la carte. Je ne dispose que d'un seul anticorps (polyclonal) capable de se liguer à elle (A), et d'un seul anticorps conjugué (B, polyclonal aussi) qui reconnaît l'anticorps A.  [...] Mais comme l'anticorps A est utilisé 2 fois, j'ai peur que le conjugué ne se fixe aussi aux Ac A coatés à ma plaque mais sur lesquels ma protéine ne s'est pas fixée, et que du coup j'aie à peu près le même signal partout.  [...]

[Biochimie] Méthodes de purification du lysozyme

Dans (1) J.M. Berg, J.L. Tymoczko, L.Stryer, BIOCHIMIE 6e édition, 2008(Paris)Médecine- sciences Flammarion, j'avais trouvé une succession de méthodes qui permettait d'obtenir un enrichissement de 3000 avec un rendement de 30%.. (magnifique n'est ce pas), malheureusement la bibliothèque est fermée et je n'ai pas pensé à noter tout ça et mon rapport doit être imprimé ce soir hum... merci d'avance.   [...] Si tu disposes d'anticorps spécifiques (ce qui est le cas pour le lysosyme je suppose), tu peux faire une chromatographie d'immunoaffinité (les groupements chargés négativement de ta résine sont remplacés par des anticorps spécifiques de ta protéine). tu peux trouver des protocoles sur internet, en utilisant ce terme ou bien immunocapture.  [...]

[Divers] immuno sur des coupes ultra fines pour microscope electronique

J'aimerais savoir si il est possible de fair de l'immunofluorescence sur des coupes ultrafines (60-100nm) sachant que l'échantillon utilisé à été fixé par une solution de 2%glutaraldehyde et 2%formaldhyde, suivi d'un enrobage dans de la resine (Spurr) pour obtenir des coupes fine, à l'ultramicrotome, déposées sur des grilles en cuivres.  [...] Je ne suis pas spécialiste, mais il est possible de faire un immunomarquage pour la microscopie électronique. Cependant la mise au point est loin d'être simple parce qu'il faut trouver le bon compromis entre une bonne fixation pour tes échantillons (bonne préservation ultrastructurale) et une bonne préservation de l'antigénicité de tes protéines.   [...]

[Biologie Moléculaire] Technique SELEX aidez moi!

2. On produit une protéine que l'on va fixer sur une résine. Procéder avec des anticorps coute cher vu qu'il faut renouveler les billes à chacune des étapes... On procèdera plutôt avec une protéine taguée avec des trucs du genre polyHis (pET), GST (pGEX), Halo (pHaloTag), etc.  [...] Ben... Le foot print c'est la jolie technique sur le papier. Après, quand il faut mettre les mains dedans tout change. Donc non, ce n'est pas plus simple techniquement. Ensuite pour faire un foot print il vous faut connaitre une région de liaison supposée pour votre protéine. Quand vous n'en avez pas, tout se complique.  [...]

Saturation BSA pour purif de protéine His-tagged

Je ne vois pas trop ce que tu veux dire... Mon problème est que ma résine accroche une protéine qui n'est pas liée à une autre protéine His taggée. En gros c'est un problème de liaison à des protéines non spé.  [...] Durant mon mémoire, j'ai du faire beaucoup de mise au point de mes WB, un des anticorps primaire donnait des bruits de fond terrible, Je suis arrivée à des résultats incroyable en enlevant la BSA d'un part et en la remplacant dans les différentes solution le lait gloria par le lait amersham.  [...]

[Biologie Moléculaire] Aide pour devoir sur chromatographie

Vous faites une filtration C'est l'adsorption sur la résine C'est une résine échangeuse d'anion ou de cation (pk ça change tout).  [...] Il faut bien que tu comprenne le principe d'une résine échangeuse d'ions et tu pourra répondre a toutes les question suivante.  [...]

[Biochimie] Quelle résine Nickel pour purifier mes protéines?

Ta pas que cette étape de purification pour ta prot de toute façon j'imagine Sinon une ionique et une GF derrière et ta prot sera 100% pure.   [...] Je parle de résine Cobalt parceque apparement elle est plus spécifique que la résine Nickel mais je n'ai jamais essayé.  [...]

[Biologie Moléculaire] Purification Protéines Tag 6His

1) Les protéines se fixent mal aux billes de nickel donnant un rendement très faible, je retrouve la majorité de la protéine dans le surnageant, malgré 4 heures d'incubation. Il est possible qu'elles aient perdu leur Tag, je vais vérifier avec un anticorps cet après midi, mais si tel est le cas à quoi cela peut-il être du.  [...] Donc c'est un anticorps anti-ta protéine c'est bien ça Tu n'aurais pas un anticorps anti-6His à ton labo pour vérifier si c'est l'étiquette ou une partie de ta prot qui est dégradé.  [...]

[sauvetage d'animaux] bougie en rat mort

Si t'arrive a obtenir ça (mais un rat écrasé je pense pas que ça le fasse), tu peut après un passage a l'alcool vite fait, le trempé dans de la résine très liquide, pour le recouvrir entièrement et l'isolé de l'aire embiant. et après tu le met dans ta gelée.  [...] Ou autre solution, tu coule un bloc de résine avec ton rat dedant (limite faire un premier passage avec une résine plus liquide pour bien recouvrir et que ça pénètre bien partout a l'intérieur du rat, faut éliminer le plus d'aire possible).  [...]