• Santé - Levures, Extraction, ADN

besoin d info sur la transfo des levure au PEG

Les levures possedent une paroie pour maintenir leur forme, on fait souvent des digestions des paroies des levures pour des manips tels que extraction adn genomique ou dans les techniques de microscopie. Ca depend donc si tu digere ta paroie avant des transformer tes levures ce que je ne fait jamais (les enzymes necessaires a la degradation de la paroie sont cheres).  [...] Le choc thermique entraine l entree du plawsmide dans la cellule. Certains marqueurs de selction sur les plasmides necessitent un temps de recuperation avant de les etaler sur milieux selectifs. Voila j espere que ca a pu t aider.   [...]

[Biochimie] A quoi ça sert?

Es ce quand on est a PH acide ou à PH basique que l'on élimine l'ADN JE sais que l'ADN est de charge négative donc je suppose que c'est quand on est a PH acide mais dans mon protocole, on m'indique qu'il faut tout d'abord mettre de la soude à 10 mol/L, es ce pour rompre les liaisons de la membrane de la levure.  [...] dans mon cas la centrifugation intervient après le passage pas l'abaissement de ph puis de température. on récupere alors le surnagent, le culot contenant tout les detritus des levure frache si je ne me trompe pas. Et après es ce l'alcool à 95% qui permet une centrifugation ou juste parce que la centrifugation n'est qu'a 3000 tours.  [...]

je suis en mode panique pour mon rapport(transfo levure)

Les levures dépourvues de paroi, sont incubées en présence d'ADN plasmidique recombinant, de poly éthylène glycol (PEG) et de chlorure de calcium. D'autre part, des cellules intactes (avec une paroi), sont traitées par une solution saline alcaline d'acétate de lithium qui a pour effet de fragiliser les membranes, puis incubées avec l'ADN plasmidique et le PEG.  [...] La pénétration de l'ADN dans les levures ainsi traitées est stimulée par choc thermique. L'ADN étranger peut être maintenu dans la cellule transformée sous une forme intégrée à l'ADN chromosomique par recombinaison homologue ou bien sous une forme réplicative indépendante du chromosome.  [...]

Extraction d'acides nucléiques

J'aurais voulu connaître succinctement les principes généraux (et pas les protocoles..) des méthodes d'extraction de l'ADN plasmidique, ADN totaux, ADN chromosomique, ARN. Parmis les ARN peut on séparer les ARNr, ARNt et ARNm.  [...] Sinon a partir de la solution (extraction à partir de cellule de mammifere, levures etc..) de départ tu transformes des bacteries pour isoler le plasmide.  [...]

[Biologie Moléculaire] Dégradation de la cycline D1

Pour le double hybride, on fusionne l'ADNc de la cycline D avec le domaine de transactivation de GAL4, et en parallèle on fusionne les ADNc des ubiquitine ligase connues avec le domaine de liaison à l'ADN de GAL4. Les deux vecteurs sont transfectés dans des levures avec un gène rapporteur sous contrôle d'un promoteur contenant l'élément de réponse de GAL4.  [...] Si la cycline D interagit avec une ubiquitine ligase, cette interaction rapproche le domaine de liaison à l'ADN de GAL4 avec son domaine de transactivation et cela active l'expression du gène rapporteur qu'on peut visualiser (levures bleues si le gène rapporteur code la beta-galactosidase).  [...]

Les prions, le troisième moteur de l'évolution

Après les mutations génétiques et l'épigénétique, les prions viennent de montrer qu'ils pouvaient eux aussi contribuer à la sélection naturelle, chez les levures au moins. Une découverte importante qui pourrait bien ouvrir des pistes nouvelles dans les sciences de l'évolution.  [...] Pourtant, à la lumière des travaux publiés très récemment dans Nature, les prions ont montré qu'ils pouvaient également faciliter la survie. Du moins, chez les levures ( Saccharomyces cerevisiae ). Ils permettraient une adaptation quasi instantanée à un environnement hostile et pourraient être transmis à la génération suivante, sans changement apparent dans l' ADN ou dans la régulation génétique.  [...]

[Biologie Moléculaire] Transformation levure

afin de transformer des levures avec un plasmide linéarisé+cDNA pour le recombiner, on a ajouté de l' ADN dénaturé (de thymus de veau) pour favoriser la transformation. Cet ADN aurait une fonction de carrier, mais je ne comprends pas trop comment ça marche, si qlq un peut m eclairer.  [...] cet ADN protège ton plasmide de la dégradation, car il est beaucoup plus abondant que le plasmide. Donc les nucleases vont en premier le dégrader.  [...]

Les empreintes génétiques !

Je sais qu'il faut extraire l'ADN des cellules, que le test s'effectue sur des parties non codantes de l'ADN mais hautement répétées (mini et micro satellites), qu'il faut ensuite procèder à une PCR (3étapes) pour multiplier les fragment d'ADN.  [...] Il faut lire lyser les cellules, c'est à dire détruire les cellules pour libérer le contenu cellulaire, dont l'ADN. En gros ça consiste à dissoudre/fragmenter les membranes, à enlever les protéines, etc., dans des conditions qui permettent cependant de garder intact l'ADN, qui est récupéré au final. On lyse aussi des bactéries, des levures.  [...]

[Divers] Cout stockage ADN

Donc ça sera à peu près ce que j'ai dit, on peut ajouter le cout du contenant (le tube) ainsi que du liquide de conservation si on veut être pointilleux.   [...] si l'ADN est plus complexe, et doit servir dans sa totalité sans recombinaison, etc... pour retransformer des levures (par des YAC par ex), ça se justifie.  [...]

Polyéthylène glycol (PEG)

Le Polyéthylène glycol ou PEG et utilise pour la transformation (insertion d'ADN) de nombreux type de cellules, entre autres les levures et les protoplastes de plantes.  [...] Le PEG est un polymère qui va déstabiliser (de façon réversible) les membranes plasmiques, permettant donc le transfert de l'ADN au travers de la membrane.  [...]