• Santé - Levures, Aide, Fragment, Plasmide

[Génétique] Levure

c'est simple on a une souche de levure diploide et qui ont perdu leur gene ura3, codant pr l'uracile, sur leur 2chromosomes, et on veut transformer ces levures a l'aide d'un fragment d'un plasmide, contenant ce gene ura3.on selectionne ensuite les cellules prototrophe pr l'uracile et on me demande.  [...] De mémoire, on peut transformer des levures avec des fragments de PCR (j'avais fait ca en TP à l'époque). Ce fragment s'intégrait par recombinaison homologue (question n°1).  [...]

[Biologie Moléculaire] Décision de replication de l'ADN

On a construit le plasmide suivant. ORIcolE1, gène conférant résistance à l'Amp, gène de sélection chez les Levures ( ura3 + ), en insert = fragment d'ADN génomique de S. cerevisiae. On a procédé à une transformation des cellules de S. cerevisiae [ura - ] par cette construction.  [...] Il y a deux cas possibles. soit le plasmide contient une origine de réplication reconnue par la machinerie de la Levure et dans ce cas on aura une prolifération des cellules l'ayant, soit le plasmide n'en contient pas et les cellules ne survivront pas.  [...]

[Microbiologie] Stabilisation d'un plasmide chez la levure

Je souhaite savoir si il est possible de stabiliser le plasmide en cultivant le mutant sur un mileu riche (Malt Wickerham) et en présence d'ampicilline (en effet sur le plasmide est présent un gène de résistance à l'ampicilline). Je me permets de poser cette question puisque dans la bibliographie les levures ne sont pas sélectionnées via l'utilisation des gènes de résistance aux antibiotiques (contrairement à ce qu'il se fait chez les bactéries).  [...] Concernant les prions, je ne savais pas. Moi je stockais juste mes levures à +4°C pour conserver des levures avec mes plasmides d'intérêt (lors des mes cribles doubles hybrides). Donc je relancais une culture liquide quand nécessaire, et je faisais une extraction de plasmide.  [...]

[Biotechnologie] Clonage Eucaryote

Concernant le clonage de cellules eucaryotes, est ce possible qu'une cellule de mammifère accepte un plasmide et le réplique comme il faut ou ce plasmide (contenant le gène étranger) doit il absolument être intégré au génome cellulaires.  [...] Celà dit, quelque chose me turlupine l'esprit, dans le cas de création de souris transgeniques, on a vu qu'on prenait un ovule qui vient d'être fécondé par un spermatozoïde. Cette cellule possède donc un noyau mâle et un noyau femelle. Le noyau mâle étant plus gros, on y injecte grâce à une très fine aiguille de l'ADN. Mais alors, ce n'est pas de l'ADN plasmidique.  [...]

[Biologie Moléculaire] Plasmide

Bonjour, je voudrait savoir s'il était possible d'intégrer un plasmide à une cellule eucaryote D'après ce que j'ai trouvé sur le net, les seuls eucaryotes à posseder un plasmide sont les levures saccharomices cervisiae. Est-ce que ce sont vraiment les seules eucaryotes à avoir un plasmide Et est-ce qu'un eucaryote qui n'a habituellement pas de plasmide pourrait en incorporer un et le rendre fonctionnel.  [...] Les levures peuvent posséder des structures moléculaires semblable à des plasmides, qui reste en périphérie du noyau, sont répliquées, on les appelle les épisomes (j'espère ne pas me tromper, ça fait un moment que je n'ai pas vu de levures à part dans ma machine à pain ).  [...]

[Biochimie] Mecanisme de ligation SOS clonage

Je dois cloner dans ce plasmide car je vais l utiliser plutard pour transformer des levures par electroporation avec ce plamside PICZ recombinant.  [...] Par contre dans mon cas ou déjà j'avais un tout petit insert par rapport à mon fragment, et qu'il fallait que je mette 100 ng de plasmide pour 8 ng d'insert si je me souviens bien... Je me suis dite que jamais ça marcherait. donc voilà, à chaque situation sa réponse.  [...]

Extraction d'acides nucléiques

LA séparation ADNg et plasmide se fait essentiellement sur la capacite de la soude d'attaquer plus rapidement l'ADNg que le plasmide (miniprep). Mais aussi sur le fait que l'ADNg se fragmente tres facilement vu sa taille.  [...] Sinon a partir de la solution (extraction à partir de cellule de mammifere, levures etc..) de départ tu transformes des bacteries pour isoler le plasmide.  [...]

[Biologie Moléculaire] Solubilité de la Vitamine A (rétinol)

Je poste ce petit message car j'ai vraiment vraiment besoin d'aide.. C'est mon ultime recours.  [...] Je suis étudiante en M1 de Bio et je dois préparer un TP de A à Z.. J'ai choisi de travailler sur l'effet de la vitamine A sur des levures S.cerevisiae. Je veux tester des grosses concentrations de rétinol (40g/L) sur la viabilité des levures. Or la solubilité de la vitamine A dans l'éthanol est juste INTROUVABLE sur le net.. A l'aide.  [...]

[Biologie Moléculaire] Transformation levure

afin de transformer des levures avec un plasmide linéarisé+cDNA pour le recombiner, on a ajouté de l' ADN dénaturé (de thymus de veau) pour favoriser la transformation. Cet ADN aurait une fonction de carrier, mais je ne comprends pas trop comment ça marche, si qlq un peut m eclairer.  [...] cet ADN protège ton plasmide de la dégradation, car il est beaucoup plus abondant que le plasmide. Donc les nucleases vont en premier le dégrader.  [...]

[Biologie Cellulaire] Marqueur spécifique du réticulum endoplasmique chez la levure

[Biologie Cellulaire] Marqueur spécifique du réticulum endoplasmique chez la levure.  [...] Je souhaiterais observer les levures en microscopie optique et j'aimerais avoir un marqueur spécifique du réticulum endoplasmique comme une protéine exclusivement confiné au RE que je pourrais coupler avec une protéine fluorescente. Merci de votre aide.  [...]