• Santé - Kit, Extraction, ARN

[Génétique] Principe de l'extraction d'ARN???

J'utilise pour l'extraction d'ARN, le kit Qiagen RNeasy(extraction en colonne), voila j'aimerai savoir sur quels principes il repose.  [...] Alors voila pour moi l'ARN en solution n'a pas la même charge selon s'il est en solution aqueuse ou dans de l'alcool par exemple.  [...]

[Biochimie] Améliorer la quantité, qualité et pureté d'une extraction d'ARN

J'ai effectué une extraction d'ARN à partir des cellules THP-1 humaines par deux techniques différentes. la technique d'extraction par précipitation en utilisant le trizol et la technique par extraction par colonne utilisant le kit direct-zol ARN miniprep et des colonnes appel zymo-Spin IIC.  [...] Le début de l'extraction est très important. conditions d'homogénéisation (mécanique, chimique), il faut se mettre à froid, ainsi que la quantité de matériel (trop est pire que pas assez.). Comment avez vous procédé.  [...]

[Biologie Moléculaire] protocole extraction ARN (pas de kit, ni trizol)

Essaye un protocole d'extraction d'ADN classique, lyse avec un détergeant, puis précipitation a l'alcool. Si tu manipules proprement alors tu auras de l'ADN et de l'ARN.  [...] Dans le molecular cloning, il y a un protocole pour des extractions d'ARN a base de thiocyanate de guanidine et phénol. Un genre de trizol maison quoi.  [...]

Problème RT-PCR sur cDNA

Conclusion, soit tu as une erreur de prédiction de la structure intron/exon de ton gène, soit tu as un epissage alternatif, soit tu as séquencé de l'ADN génomique (contamination de ta prep' d'ARN) -. As-tu fait un traitement à la DNase.  [...] Une autre possibilité c'est que tu amplifies un cDNA issu d'un ARN non mature (dont l'epissage n'est pas fini). Pour conclure, je te conseille de prendre un kit d'extraction qui élimine les ARN nucléaires et qui séléctionne uniquement les ARN cytoplasmique.  [...]

Dégradation des ARNs DNAsés ?

J'ai un petit soucis avec mes manips en ce moment. En vue de quantifier des ARNm spécifiques, une extraction d'ARN au trizol à été effectuée, puis Dnase des RNA (avec RQ1) et RT avec oligo dT, puis finalement PCR radioactive. Le problème, c'est que les témoins pour la PCR ont marché, mais aucun de mes ARN n'a été amplifiés.  [...] Est il possible pour toi de faire une extraction de tes ARN via un kit Qiagen Il n'utilise pas le Trizol et est peut etre moins dégradant. Pour info, je fais mes extractions en kit Qiagen et je passe par l'étape facultative de DNaseI. Je n'ai jamais eu de problèmes personnellement.  [...]

[Biologie Moléculaire] Concentration dosage ARN

Si je lave ma cuve d'électrophorèse avec du SDS 10%, et que je rince à l'eau DEPC... que j'utilise que des erlens/éprouvette stérile, que je fait mon tampon de migration avec de l'eau DEPC. Croyez-vous que cela sera suffisant pour éviter les dégradations.   [...] Ca me parait juste énorme d'avoir de telles concentrations grâce à un kit commercial. J'avais des rendements dans ces eaux là mais par la bonne vieille méthode de l'extraction au phénol, mes rendements par kit étaient beaucoup moins importants.  [...]

[Biologie Moléculaire] Extraction d'ARN pour puce

.. j'ai testé mon extraction sur des cellules cultivés en milieu optimum et c'est pareil, un énorme pic 5S. ma principal méthode d'extraction est phenol/chloroforme, j'ai testé un kit macherel, j'ai eu le m^me pic, avait vous une idée sur ce que peut etre ce pic des 5S des ARN degradés.  [...] Marrant ça (si j'ose dire). La plupart du temps, si on fait un gel controle d'extraction d'ARN, on verra une bande correspondant au 5S, mais aussi celle des 16S. Tu n'en as pas du tout.  [...]

[Biologie Moléculaire] Extraction ARN AGPC et phénol/Chloroforme

J'ai toujours eu le sentiment que l'extraction au phenol/chloro, le port des gants, l'autoclave, etc. était une procédure courant pour l'extraction d'ARN. Si la GT possède de tels avantages, pourquoi ne pas l'utiliser systématiquement Ou peut-être est-ce le cas et je ne m'en suis pas rendu compte Je ne suis vraiment pas une experte dans le domaine.  [...] dans de nombreux kit d'extraction d'ARN sur colonne (je ne citerai pas de marque ), le thiocyanate de guanidium est ce qui est le plus utilisé. Notamment pour la grande pureté des échantillons qu'il permet d'obtenir.  [...]

Différence RT_PCR semi-quantitative et Q-PCR

- pour l'extraction des ARNm. est il possible de conserver les culots de cellules pendant quelques semaines à -80°C avant de faire l'extraction ou cela risque t'il d'abimer les ARN.  [...] il m'arrive qd je suis un peu la bourre dans les manips, de congele (-80°C)r mes cellules dans le tampon d'extraction utiliser lors de la purification d'ARN (tampon RLT du kit RNeasy de chez qiagen).  [...]

[biologie moléculaire] qualité d'ARN

Je pensais qu'il fallait dénaturer à tout prix l'ARN qui était en pelote avec du mops et du formaldéhyde (entre autre) à moins qu'avec un kit d'extraction l'arn ne soit déjà déroulé.  [...] pour l'extraction d'ARN, le pH de ton phénol chlo doit etre 4.7 (saturation au citrate). Ensuite le ratio 260/230, qui doit être strictemnt supérieur à 2 reflète les contaminations en sels et alcools. Le phénol abborbe plutot à 270 (noyau aromatique).  [...]