• Santé - Kit, Contrôle, Positif, Plasmide

[Biologie Moléculaire] Probleme de clonage avec pT7Blue

Si j'ai bien compris le TP (en anglais...) vuque le test positif n'a pas marché avec pT7Blue plasmide, on a donc utiliser pBluescript, mais je n'en suis pas sure... En cas de controle positif du kit commercial negatif, il faut donc changer le vecteur A quoi peut etre dut cet echec.  [...] le controle positif fut fait au debut du TP... mais il ne marcha pas avec le plasmide pT7Blue, quelles sont les raisons possibles.  [...]

[Biologie Moléculaire] Mutagénèse dirigée

Dans ce kit le contrôle positif de la mutagénèse utilise un plasmide Whitescript de 4,5 kb. Après la mutagénèse et la digestion des produits par l'enzyme Dpn1, je fait un gel de 0,8% agarose pour vérifier avant la transformation si ma mutagénèse à marché.  [...] ...Seulement là j'ai un petit soucis parce que dans mon contrôle (plasmide whitescript) et dans mon echantillon, tout ce que je dépose sur mon gel reste dans le puit...(je dépose 5µl de produit de PCR).  [...]

Comment faire un contrôle de son luminomètre?

J'utilise l'ATPmétrie pour une étude de nettoyage des machines à traire.   [...] Utilisant un Luminator-T de Charm, je leur ai commandé un kit de contrôle positif afin de savoir si mon appareil est bien qualibré. Cependant, il n'y avait pas de notice avec les produits et je ne sais pas du tout comment m'y prendre. Si quelqu'un pouvait m'aider pour réaliser ce contrôle, je lui en serais très reconnaissante, merci d'avance.  [...]

[Biologie Moléculaire] Différences entre les types de Taq ?

Quelle est la différence entre les types de Taq (qo tag, biotools, bioline...). Donnent t-elles les mêmes résultats si non quelle est la bonne pour faire une commande, sachant quelle est destinée pour une PCR d'un ADN de dermatophyte (champignon filamenteux).   [...] Concernant ta PCR qui n'a pas marchée, je ne vois pas personnellement de façon de l'interpréter. Tu dois la recommencer. As tu inclus un contrôle positif As tu vérifié dans la notice de ton kit pour PCR que tu respectais les concentrations recommendées.  [...]

test Elisa

Quand je parlais de contrôle a effectué soit-même, je voulais faire allusion à des contrôles avec des produits n'appartenant pas au kit.  [...] Tout les contrôles du kit Elisa se font avec des réactifs livrés avec le kit Les laboratoires par exemple, au lieu de prendre leur propre réactif (ex. sérum positive à une maladie) ils prendront les réactif livrés avec le kit.  [...]

[Biologie Moléculaire] Problème lors de la transformation avec DH5a E.coli.

J'ajoute toujours un point sans ADN dans ma transfo pour vérifier que rien n'est contaminé par un plasmide ou une bactérie AmpiR. en 25 ans de clonage, ce témoin est sorti positif deux fois. Le risque est faible mais pas nul.  [...] Nous utilisons le SYBRsafe depuis 5 ans (on peut le voir sous un dispositif à lumière bleue qui peut être facilement bricolé, pas besoin d'acheter le transilluminateur hors de prix d'Invitrogen), nous avons mené des clonages en parallele pour comparer BEt vs SYBRsafe et il y a presque deux logs d'écart en efficacité de transfo entre un plasmide religué en présence de BEt et le même en présence de SYBRsafe.  [...]

plasmide pDONR/Zeo

Quant à ccdB, il code une protéine poison et, comme CmR, est un marqueur de sélection positive. si ton gène est bien inséré dans le plasmide, au bon endroit et tout, ccdB ne sera plus fonctionnel et en principe seul les clones recombinants (= portent les plasmides ayant incorporé un gène) sont viables.  [...] ok merci de ta réponse et ROP est ce que tu ne connaitrais pas un site qui parle des plasmides ligation... en général en fait les bases.  [...]

[Biologie Moléculaire] Mutagénèse/clonage

Pour le kit de mutagenèse je te conseille tres vivement le kit de stratagene quick change mutagenesis. Il est super efficace avec un taux de réussite constat de 80%. Par contre il faut que ton plasmide soit petit (plus il est petit mieux ca marche), quite a recloner ton insert dans un vecteur de type pUC19 (au final tu gagneras du temps).  [...] Sa marche j'ai enfin ma mutation. Par contre petit conseil pour les prochaines laisser agir plus longtemps qu'une heure avec DPn1 car en piquant 3 colonies 2/3 était sauvage.  [...]

Les zombies ne mettraient que 100 jours pour anéantir l'humanité

Le parallèle entre une invasion de zombies et une épidémie mortelle est régulièrement fait par des organismes très sérieux, tels The Lancet, un journal médical britannique, ou encore le Centre de contrôle et de prévention des maladies d'outre-Manche. Objectif.  [...] Et c'est également dans cet état d'esprit que le Centre de contrôle et de prévention des maladies américain a édité, en 2011, un guide antizombies intitulé Get a kit, Make a plan, Be prepared (comprenez &thinsp.Obtenez un kit, faites un plan, soyez préparés) et dont l'objectif était de sensibiliser la population aux attitudes à adopter en cas de pandémie.  [...]

[Biologie Moléculaire] pb de mutagenèse dirigée

mon problème est que je n'obtient pas de colonies avec mon plasmide recombiné, les témoins de mutagenèse et de transformation sont OK, j'ai bien des colonies bleues et blanches. mais les bactéries traitées avec mon plasmide ne poussent pas sur le milieu de culture LB+ampicilline quelque soit la quantité d'ADN ou de solution bactérienne étallée.  [...] Mon conseil est de modifier tes cycles de PCR pour améliorer ton amplification (je fais classiquement au moins 25 cycles). et il m'est arrivé de remplacer la pfu par la phusion de chez (Finzyme) qui amplifie 1kb en 15s. ce qui est appréciable pour les gros plasmides.  [...]