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mesure activité enzymatique bacterienne

J'ai beaucoup chercher sur internet une explication de la méthode de SOMOGY et NELSON pour la mesure de l'activité enzymatique d'une suspenion bactérienne, et j'ai rien trouvé.Est ce que quelqu'un connait le principe ou le protocole ou un site où la méthode est détaillée Merci.  [...] Il s'agit d'une vielle méthode que plus personne n'utilise pour mesurer la présence de sucre réducteurs dans une suspension.  [...]

[Biochimie] Méthodes de purification du lysozyme

Avec le calcul de l'activité enzymatique j'ai un enrichissement de 16 pour un rendement de 32%. Je trouve que ma purification demande un sacrifice trop important pour un si petit résultat. Dans la partie discution de mon rapport je voudrais dire qu'une autre méthode aurait pu me permettre d'avoir un meilleur taux de purification avec un meilleur rendement, mais voilà, je n'en trouve pas sur internet concernant spécifiquement les protéines.  [...] Je précise juste que l'on a utilisé une méthode par compétition dans la colonne et non pas de variation de pH car le pHi du lysozyme est de 11.. Et si l'on met un pH plus élevé on aurait effectivement eu une dénaturation de la protéine.  [...]

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Les conditions décrites précédemment sont valables pour une synthèse efficace et constante de COX-2 sans que celle-ci n'interfère avec l'activité de COX-1. Mais notre but étant de mesurer l'activité enzymatique de chaque isoenzyme, nous devons nous assurer que le substrat de la réaction enzymatique, l' acide arachidonique, ne soit pas en quantité limitante.  [...] Les conditions d'incubation des lymphocytes et des monocytes retenues pour mesurer l'activité enzymatique de COX-1 sont 1 heure en présence d'acide arachidonique à 50µM et de calcium ionophore à 50µM, de cette façon la synthèse de COX-2 n'est pas induite. Pour cette dernière il se pose un autre problème, si les cellules sont incubées pendant 3 à 4 heures, la COX-1 est présente de façon active, ce qui interférerait avec une mesure de l'activité enzymatique de la COX-2.  [...]

La mesure de l’activité enzymatique par spectrophotométrie et sa relation avec l’NAD

la forme réduite de NAD présente un pic d,absorption dans l'UV à 340 nm, cette propriété spectrale fonde le principe de la mesure de la vitesse des réactions enzymatiques impliquant ces coenzymes.  [...] Je comprends que lors de l'étude de l'activité enzymatique d'une enzyme, si les substrats et les produits n'ont pas d'absorbance cela implique la mesure de l'absorbance d'un coenzyme impliqué dans la même réaction enzymatique. Mais je n'arrive pas à assimiler le suivant.  [...]

[Biochimie] Activité enzymatique

J'ai eu un TP sur l'activité enzymatique de la phosphatase alcaline. Il y a eu plusieurs manipulations (avec et sans inhibiteur), et avec les résultats d'absorbance qu'on a mesuré, on doit déterminer le Km et le Vmax à partir de différentes méthodes de linéarisation (Lineweaver & Burk, Eadie & Hofstee et Hanes).  [...] Focalisons-nous par exemple sur la méthode de Lineweaver & Burk (ordonnée en min/dA et abscisse en 1/millimolaire) pour une réaction sans inhibiteur.  [...]

[Biologie Cellulaire] l'activité enzymatique

pour commencer il faut savoir que les enzymes sont des protéines et on sait très bien que les protéines sont issues de l'expression des gènes alors tu voit maintenant la relation étroite entre activité enzymatique et génotype,  [...] Pour revenir à ta question (dans quelle mesure l'activité enzymatique dépend-elle du génotype), trouve le lien entre une enzyme et le génotype (transcription =. traduction notamment) puis le lien entre une activité enzymatique et l'enzyme elle-même (cette activité dépend de l'enzyme, sa forme etc).  [...]

[Biochimie] Préparation tampon phosphate

4. Mesure du pH et ajustement du pH s'il n'est pas ok. Pour ajuster, il faut ajouter un acide (ou une base) ne contenant QUE les espèces en solution.  [...] mais je veux savoire si la concentration du tampon phosphate finale est de 50mM et comment je met un pH 7,4.   [...]

[Biochimie] Comparaison entre deux méthodes de mesure enzymatique

tandis que pour la méthode avec le test ELISA AE de l'orde de 200 µmol.min-1 Soit une activité enzymatique 2millions de fois plus élevée.  [...] en fait non c'est le contraire pour la manipulation au test ELISA je trouve des valeurs d'activité enzymatique inferieure (de 3 fois).  [...]

[Biochimie] Dtt

Bonjour, à quoi sert le DTT lorsqu'on mesure l'activité d'une réaction enzymatique.  [...] Ce que je connais du DTT c'est qu'il permet de stabiliser les protéines possédantes des groupements soufrés, son pouvoir réducteur sur les thiols en fait un réactif très utilisé en biochimie pour empêcher l'oxydation des cystéines dans les protéines.   [...]

Activité enzymatique du lysozyme purifié

Je suis en plein rapport de T.P. et j'ai pas mal de doute sur la méthode que j'ai employé puisque c'est la première fois qu'on calcule une activité enzymatique.  [...] Mes doutes sont plus sur la méthode, surtout si il ne faut pas non plus multiplier par le facteur de dilution la quantité de protéine, comme pour trouver l'activité enzymatique de Fo non diluée, afin de trouver le reste.  [...]