• Santé - Intérêt, Sites, Restriction, Enzyme

[Génétique] phage

bonsoir. J'espere que quelqu'un saura m'éclairer. la partie centrale des phages peut etre utilisée comme vecteur de clonage. mais, est ce qu'on retire cette partie pour la remplacer par un adn d'intéret, ou est ce qu'on enleve seulement quelques morceaux pour en faire des sites de restriction d'une enzyme de restriction spécifique, et alors l'adn que l'on veut cloner serait ajouté dans la partie centrale.  [...] mais, est ce qu'on retire cette partie pour la remplacer par un adn d'intéret, ou est ce qu'on enleve seulement quelques morceaux.  [...]

[Biologie végétale] Compréhension d'un article sur les OGMs

Pour moi, pour générer un OGM, on devait ajouter ou utiliser des sites de restrictions déjà présent et cliver ces derniers par une enzyme de restriction (ER) d'une part dans le gène d'intérêt que l'on veut ajouter dans l'OGM et d'autre part dans le plasmide ou vecteur qui transportera ce gène d'intérêt.  [...] Et donc, une fois obtenu notre gène d'intérêt en surproduction et purifié, c'est celui là qu'on est censé reprendre en 2.4 pour la suite de l'analyse, sinon le 2.2 aurait été inutile Ensuite on reprend donc la séquence qu'on amplifie de nouveau en PCR pour y introduire de nouveaux sites de restriction et recréer un vecteur qui sera cette fois inséré dans le tabac par la technique leaf disk (si j'ai bien compris).  [...]

[Biochimie] Manipulation de l'ADN: plasmide

Les plasmides utilisés en recherche sont souvent des plasmides très modifiés par les sociétés qui les vendent. Afin de pouvoir insérer facilement des portions d'ADN d'intérêt dans le plasmide, on a prit l'habitude de placer des sites de restriction. C'est à dire des sites reconnus par des enzymes capables de couper l'ADN.  [...] L'avantage de ces enzymes est qu'ils coupent des séquences en acide aminés très spécifiques et forment (souvent) ce qu'on appelle des bouts collants (ils ne coupent pas les doubles-brins nets mais laisse dépasser un des deux brins). L'intérêt de ceci est qu'un bout collant généré par une enzyme de restriction aura tendance à s'attacher à un bout collant généré par la même enzyme.  [...]

[Divers] clonage et maths

Le problème avec le clonage d'un fragment d'ADN c'est que le matériel n'est pas classiquement présent dans un lycée (pas de bactérie, pas de plasmide, pas d'enzyme de restriction). Vous pourriez éventuellement tenter de trouver un labo qui veuille bien vous accueillir 3 demies journées pour vous faire faire un clonage (il serait bien sympa ce labo).  [...] On retrouve aussi des math au moment où l'on s'intéresse à combien d'enzyme on met (restriction, ligase) et combien on a de sites, de restriction, de ligation, combien de temps on veut prendre etc... Jusque là c'est finalement que des changements d'unités, des règles de trois.  [...]

PCR, template et riz anti-alzheimer

- pour faire cela, on prend des amorces sens et anti-sens (type AB-5'-HindIII et AB-3'-XhoI, donc entourant le gène d'intéret) contenant des sites de restrictions et on fait une PCR.  [...] 3) La découpe aux sites de restriction permet a) de récupérer le gène AB d'intérêt et b) de l'insérer dans les mêmes sites de restriction sur le plasmide commercial.  [...]

[Biologie Moléculaire] Contamination d'ARN par de l'ADN

Après votre PCR, procédez à une digestion enzymatique de vos produits par l'enzyme de restriction DpnI. L'intérêt est que cette enzyme coupe un site de 4pb (donc très fréquent) uniquement quand celui ci est methylé. Du coup vous coupez le plasmide qui a été méthylé lors de sa production en bactérie mais pas vos produits PCR.  [...] Je ne pense pas que digérér par DpnI après l'amplification soit utile dans la mesure ou il s'agit d'une RT PCR, possiblement contaminée par de l'ADN génomique, et non de l'amplification d'un ADN venant d'une bactérie. Ceci dit, si tu soupçonnes un problème de DNAse, tu peux prédigérer tes échantillons par une enzyme de restriction (avant de faire la PCR).  [...]

[Génétique] Intégration ADNc

Les enzymes de restriction coupent des sites spécifiques, en laissant des sites coupés spécifiques de chaque enzyme. Si les sites sont semblables, il peut donc y avoir jonction. C'est comme cela qu'on insère un gène.  [...] Même si tu peux aussi couper ton plasmide avec une ou 2 autres enzymes qui génèrent des extremités cohésives compatibles avec celles de ton insert. C'est-à-dire que tu peux avoir un site de restriction reconnu par une enzyme différente mais une fois la coupure faite, l'extremité genérée est compatible avec celle de ton enzyme.  [...]

[Biologie Moléculaire] carte de restriction?

C'est la position des sites de restriction d'une enzyme sur la séquence d'ADN digéré.  [...] Sara789, aurais-tu oublié les règles basiques de politesse.   [...]

[Biotechnologie] Bioluminescence par bactéries recombinées

A partir d'un vecteur (plasmide, yac, bac...) vous transférer la séquence d'intérêt depuis la bactérie naturellement luminescente. POur se faire, clivez la séquence d'intérêt à l'enzyme de restriction adaptée (il y en a à foison selon les coupes franches ou cohésives).  [...] Je pense aussi que pour completer le tout sur comment elle peut réponse aux métaux, il faut je pense se referer à la régulation de l'opéron fer qui code pour la ferritine ( il me semble ) et qui répond au fer grace a des sequence Iron Responsive.   [...]

[Biologie Cellulaire] enzyme de restriction

On prélève l'insert (le gène à cloner) grace a une enzyme de restriction qui va cliver l'ADN sur des sites de restriction spécifique (c'est une séquence palindromique). On peut ensuite amplifier l'insert par PCR. puis l'insérer dans le polylinker avec une ligase.  [...] Si on utilise la même enzyme de restriction pour le vecteur et l'insert, on aura le site de restriction du vecteur qui va correspondre aux extrèmités débordantes de l'insert, donc celui-ci pourra s'hybrider facilement avec le vecteur.  [...]