• Santé - Intérêt, Séquences, Sondes

[Biologie Moléculaire] MAPH et MLPA

actuellement en PCEM1, je n'ai pas très bien compris le principe des méthodes MLPA et MAPH pour la détection de grands remaniements Je ne comprend pas l'interet des séquences R et F de part et d'autre des sondes, surtout que l'on ne m'a pas expliqué ce que c'était.  [...] je suis bien consciente que je ne suis pas la seule a passer des concours et examens. Je ne demande pas de chercher pour moi mais je demande que quelqu'un me fasse part de ces connaissances (deja acquises) sur ce sujet s'il y en a, c'est tout.   [...]

[Microbiologie] Hybridation Southern Blot

Vous parlez d'hybridation avec la sonde C'est le principe clef de cette technique. on crée une sonde taggée (avec un radio-isotope ou un fluorophore) qui cible la séquence d'intérêt. La sonde s'hybride avec la séquence cible, on lave le gel de l'excédent de sondes, puis on redarde où s'est hybrider la sonde relativement sur le gel.  [...] On remet tout ce petit monde en solution, on élimine avec des sondes (micro-array ou autre technique) les séquences qu'on connait et qui correspondent à des protéines ne nous intéressant pas, et s'il reste encore quelque chose, on le séquence.  [...]

[Génétique] comment obtenir des sondes spécifiques pour un marquage chromosomique avec les séquences alu?

Je vois bien comment avec un simple marquage de ces séquences on peu obtenir un résultat dont l'analyse serait proche de celle d'un marquage bande sombres/bandes clairs. En revanche je ne comprend pas comment en se basant sur l'hybridation de ces séquences universelles on puisse arriver a un marquage spécifique in situ du chromosome 8 en vert,du 7 en bleu.  [...] ..par exemple. Comment obtient-on la spécificité des sondes Est-ce qu'il s'agit de sondes de très grandes tailles comportant dans leurs séquences le nombre et la répartition spécifique au chromosome visé.  [...]

FISH et mise en évidence de maladies géniques

à votre avis, est-ce que la technique de FISH qui utilise l'hybridation de sondes complémentaires d'une séquence d'intéret permet de mettre en évidence une mutation ponctuelle.  [...] et si c bien le cas, donc tout ce qui est en-dessous de l'échelon chromosomique n'est pas détectable et il faut utiliser SB, WB, PCR et séquençage.  [...]

Définition | Oligonucléotide | Futura Santé

les oligonucléotides servent de sondes dans les expériences de Southern blot. par exemple, on peut utiliser des oligonucléotides marqués radioactivement avec du 32 P, et complémentaires d'une séquence d'ADN d'un gène d'intérêt. La sonde sert à isoler le gène recherché dans un mélange de fragments d'ADN.  [...] les oligonucléotides de synthèse servent aussi à la mutagenèse dirigée. pour cela, un oligonucléotide contenant une petite séquence modifiée d'un gène est utilisé comme amorce pour répliquer le gène d'intérêt. L'amorce s' hybride au gène normal et permettra l'insertion d'une mutation dans le gène après réplication.  [...]

Random priming

J'ai bien compris le processus permettant d'obtenir des sondes marquées capables de s'hybrider à un ADN donné. Ce que je ne sais pas, c'est comment ces sondes peuvent s'hybrider spécifiquement à une gène d'intéret de séquence inconnue Après réfléxion, j'en viens même à me demander si c'est seulement possible via cette technique (et donc ce qu'on utilises en pratique pour faire ça).  [...] Pour les sondes de Southern blot, elles ne s'hybrident pas à une séquence inconnue mais belle et bien connue. On amplifie par PCR la sonde avec des amorces connues sur une matrice connue et on la purifie. Ensuite, avec des amorces aléatoires, on utilise cet amplicon comme matrice en présence de dNTPs marqués.  [...]

[Biologie Moléculaire] RFLP et transgenése

salut est ce que je peux savoir pour quoi on préfére d'utiliserdes sondes cDNA que des sondes génomiques pour le repérage de gène d'intéret par RFLP lors du transgenése.  [...]

[Biologie Moléculaire] Software pour le design de sondes FISH

Je me tourne vers la communauté Futura-Sciences pour demander de l'aide... Je suis actuellement sur un projet de microbiologie qui consiste à repérer des bactéries grâce à leur fonction dans un mélange complexe. Pour cela, on utilise la technique du Gene-FISH qui repose sur l'utilisation de sondes polynucléotidiques spécifiques du gène que l'on cherche à repérer.  [...] Mon problème est le suivant. je dois designer des sondes permettant le repérage de la fonction qui m'intéresse, et je cherche donc un petit logiciel qui prendrait en argument des séquences (nombreuses et assez diverses) de gènes et qui donnerait en sortie une ou un mix de sondes polynucléotidiques qui s'hybrideraient à ces gènes.  [...]

[Biologie Moléculaire] Design de sonde Taqman à partir d'une sonde FISH

Quoi qu'il arrive il te faut des amorces de part et d'autre de la sonde pour la qPCR. Réutiliser la séquence de la sonde FISH pour une qPCR en Taqman, c'est une bonne idée, d'autant qu'elle est publiée. Donc oui il te faut faire un blast et aligner les séquences spp.  [...] Je cherche un software permettant de designer des sondes polynucléotidiques pour réaliser un Gene-FISH ( et non pas un FISH taxonomique) à partir de séquences représentant une fonction qui m'intéresse (ici. hydrolase) sur des échantillons de biomasse complexe.  [...]

[Biologie Moléculaire] Southern blot !!!

Par ailleurs, ne peut-on pas imaginer que lorsque l'on utilise des sondes courtes, on puisse trouver aussi des séquences exactement complémentaire de la sonde avec une probabilité élevée.  [...] Ce faisant, tes sondes remplissent bien leur rôle. mettre en évidence après autoradiographie des séquences spécifiques.  [...]