• Santé - Intérêt, ADN, Bactérie, Enzyme

[Microbiologie] enzyme de restriction I-Ceu I !!!!

Bon j'ai pas bien compris votre réponse. il est probable qu'il soit absent de nombreux génomes ce qui permet de l'insérer artificiellement ou on veut -. tu veux dire quoi par il l'enzyme ou l'ADN.  [...] ils m'ont demandé de savoir pourquoi cet enzyme a été prècisèment choisi pour couper l'ADN de ma bactérie,quel interet de couper l'ADN de cette bacterie avec ICeuI et non par une autre enzyme.  [...]

Enzymes de restriction

Bonsoir, lorsque l'on veut étudier les ARN ribosomaux, ou d'autres séquences, pourquoi utilise t-on plusieurs enzymes de restrictions Je sais que chaque enzyme a un site de restriction spécifique mais je n'arrive pas à comprendre l'utilité de cette technique.  [...] On étudie l'ADN 16s par PCR, puis électrophorèses des fragments d'ADN obtenus grâce aux enzymes. On a alors les résultats de l'électrophorèse (pour une bactérie) avec différentes enzymes de restrictions. Puis on nous demande l'intérêt de la technique puis pourquoi il est intéressant d'en utiliser plusieurs.  [...]

[Biotechnologie] Bioluminescence par bactéries recombinées

En effet j'aimerais savoir si quelqu'un peut me dire comment on peut créer une bactérie (E.coli) bioluminescente à partir d'une quil'est naturellement(opero, plasmide..). J'aimerais avoir pas mal d'nfo aussi sur comment cette nouvelle souche est induite par un métal et donc émet de la lumière.  [...] A partir d'un vecteur (plasmide, yac, bac...) vous transférer la séquence d'intérêt depuis la bactérie naturellement luminescente. POur se faire, clivez la séquence d'intérêt à l'enzyme de restriction adaptée (il y en a à foison selon les coupes franches ou cohésives).  [...]

[Biologie Moléculaire] Pcr

Je ne comprend pas bien ta question. Pour construire un plasmide recombiannt tu as besoin de ta séquence d'intêret c'est à dire celle que tu veux intégrer dans le plasmide. Tu l'obtiens en l'amplifiant par PCR ou en digerant directement ton ADN par une enzyme de restriction.  [...] Ton fragement d'intêret peut possèder plusieurs sites de restriction spécifiques à l'enzyme utilisée. on obtient alors plusieurs fragments d'ADN dont un seul comprend le gène d'intéret. L'ADN plasmidique ne doit contenir qu'un seul site de restriction spécifique, au sein d'un gène de sélection.  [...]

[Biologie Moléculaire] les enzymes

La PCR necessite des temperatures élevées pour séparer les deux brins d'ADN. Tu peux donc deviner l'interet d'une telle enzyme.  [...] Cette enzyme, une ADN-polymérase d'origine bactérienne a en effet permis l'élaboration d'une technique révolutionnaire d'amplification de l'ADN. La PCR(réaction de polymérisation en chaîne.).  [...]

[Biologie Moléculaire] Contamination d'ARN par de l'ADN

Après votre PCR, procédez à une digestion enzymatique de vos produits par l'enzyme de restriction DpnI. L'intérêt est que cette enzyme coupe un site de 4pb (donc très fréquent) uniquement quand celui ci est methylé. Du coup vous coupez le plasmide qui a été méthylé lors de sa production en bactérie mais pas vos produits PCR.  [...] Je ne pense pas que digérér par DpnI après l'amplification soit utile dans la mesure ou il s'agit d'une RT PCR, possiblement contaminée par de l'ADN génomique, et non de l'amplification d'un ADN venant d'une bactérie. Ceci dit, si tu soupçonnes un problème de DNAse, tu peux prédigérer tes échantillons par une enzyme de restriction (avant de faire la PCR).  [...]

Premiers cas de maladie de Creutzfeldt-Jakob | Dossier

Dans de nombreux pays dont les États-Unis, le choix s'est rapidement porté vers la généralisation de l'hormone recombinante dont la synthèse se fait par des bactéries dans lesquelles le gène de la somatotropine a été transféré. Avec ce système de fabrication, toujours utilisé actuellement, il n'y a à priori pas de risque de contamination possible.  [...] Schéma d'une bactérie. Les plasmides constitués d'ADN peuvent contenir un gène d'intérêt et permettre l'expression de protéines, comme l'hormone de croissance. DR.  [...]

[Biologie Moléculaire] Adn complementaire

L'ADNc est synthétisé à partir de l'ARN messager du gène d'interêt, en réalisant généralement une transcription inverse (ARN vers ADN) à l'aide d'une enzyme virale (du même genre que celles des rétro-virus). L'ADNc est donc similaire à l'ADN messager après épissage, donc sans introns.  [...] Il sera donc plus court que le gène d'origine si celui-ci possède des sites d'épissage. Vu que c'est un ADN synthétisé par PCR, c'est donc un ADN double brin linéaire.  [...]

[Biotechnologie] Exemples d'utilisation de la mutagenèse dirigée!

Eh bien, en fait, la mutagenèse dirigée est une technique qui provoque une mutation ou plusieurs mutations sur un gène d'intérêt introduit dans l'ADN d'une bactérie. Le gène d'intérêt ainsi obtenu est ensuite multiplié de nombreuses fois par réplication et peut être étudié et introduit dans le génome végétale pour améliorer un trait.  [...] En réalité, les mutations naturelles sont si rares que cette technique permet d'amplifier le phénomène pour améliorer les caractères agronomiques de certains végétaux.   [...]

[Biologie Moléculaire] Transcription in-vitro

Je me demandais pourquoi, lors d'une transcription in-vitro, on doit obligatoirement linéariser le vecteur contenant l'ADN d'intérêt. Par exemple j'ai cloné mon ADN dans le vecteur pSFV1 pour le transcrire in-vitro je dois linéariser le vecteur à l'aide de l'enzyme Spe1 dont le site est situé juste avant le promoteur SP6 nécessaire à la transcription.  [...] Normalement on linéarise un plasmide pour pouvoir mettre un terme à la transcription in vitro. Si on ne linéarise pas, la polymérase transcrit et ne s'arrête pas. Je trouve ça étonnant de linéariser pour aider la polymérase à transcrire. Un vecteur de clonage est constitué de deux promoteurs, un qui sera en amont de notre gène (ADNc) et l'autre en aval.   [...]